[發(fā)明專利]一種鹽酸高血糖素的純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310717379.3 | 申請日： | 2013-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN103694338B | 公開（公告）日： | 2018-04-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙忠衛(wèi);潘俊鋒;馬亞平;袁建成 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/605 | 分類號： | C07K14/605;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11285 | 代理人： | 孫占華,張廣育 |
| 地址： | 518057 廣東省深圳市南山區(qū)*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 鹽酸 血糖 純化 方法 | ||
1.一種鹽酸高血糖素的純化方法，包括以下步驟：
1)前處理：以體積比30％—60％的醋酸和5％—20％的乙腈水溶液按照濃度20g/L—50g/L溶解粗肽，用水將粗肽溶液中的醋酸與乙腈二者的總體積百分數(shù)稀釋到10％—30％；
2)純化：將步驟1)所得粗肽溶液進行色譜法梯度洗脫純化，以體積比0.1％—0.4％的硫酸和體積比0.1％—0.4％高氯酸的水溶液用氨水調(diào)pH值2.5—3.5后的溶液為A相，乙腈為B相，梯度：B％：20％—40％洗脫，收集純化的高血糖素硫酸鹽溶液；
3)使所得高血糖素硫酸鹽溶液鹽析；
4)轉(zhuǎn)鹽：用反相高效液相色譜法將步驟3)所得高血糖素的硫酸鹽樣品轉(zhuǎn)鹽，將步驟3)所得的高血糖素樣品上樣，然后以質(zhì)量/體積比0.1％—0.8％的醋酸銨水溶液為A相，乙腈為B相，梯度：B％為3％—10％梯度或等度沖洗15—30分鐘；用鹽酸水溶液乙腈體系洗脫，所述鹽酸水溶液的濃度為0.1％—0.4％，該洗脫步驟所采用的乙腈濃度為40％以上，收集鹽酸高血糖素溶液；
其中所述步驟2)和4)中的色譜法使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；
其中所述步驟3)的鹽析包括：
通過常溫旋蒸的方法將步驟2)所得溶液中乙腈的比例降至15％以下，
將所得溶液的pH值用稀氨水調(diào)至6.0～7.0后放置到2-8攝氏度2～20小時，得到其中高血糖素樣品析出的渾濁液，
將所得渾濁液進行離心處理，上清液作為廢液處理，下層固體用60％～100％的高氯酸水溶液將其溶解后，再用注射用水稀釋一倍后轉(zhuǎn)入步驟4)即可。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟2)中A相的pH為3.0。
3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述步驟2)中的色譜法使用色譜柱，其直徑和長度為5cm×25cm，10cm×25cm或15cm×25cm。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述稀氨水濃度為20％。
5.權(quán)利要求1、2或4中任一項所述的方法，其中所述步驟4)中的色譜法使用色譜柱，其直徑和長度為5cm×25cm，10cm×25cm或30cm×25cm。
6.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述步驟4)中的色譜法使用色譜柱，其直徑和長度為5cm×25cm，10cm×25cm或30cm×25cm。
7.權(quán)利要求1、2或4中任一項所述的方法，其中所述步驟4)中醋酸銨水溶液的質(zhì)量/體積比為0.3％。
8.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述步驟4)中醋酸銨水溶液的質(zhì)量/體積比為0.3％。
9.權(quán)利要求1、2或4任一項所述的方法，其中所述步驟4)中所述鹽酸水溶液的濃度為0.2％。
10.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述步驟4)中所述鹽酸水溶液的濃度為0.2％。
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