[發明專利]雞新城疫病毒抗體水平相關的分子標記及其鑒別方法和應用

有效

• 申請號: 201310714390.4
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103725688A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 王艷;舒鼎銘;瞿浩;王劼;羅成龍;李寶紅
• 申請（專利權）人: 廣東智威農業科技股份有限公司;廣東省農業科學院動物科學研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 曹愛紅

技術領域

本發明涉及雞標記輔助選擇技術領域，具體地說，是涉及用于雞標記輔助選擇的雞新城疫病毒抗體水平相關的兩種分子標記及其鑒別方法和應用。?

背景技術

新城疫是由新城疫病毒引起的嚴重危害家禽養殖的呼吸道傳染病，新城疫病毒屬于副粘病毒科。新城疫在我國各地均有發生，具有發病率和死亡率相對較高，成年蛋雞產蛋率、蛋品質下降，飼料報酬低等危害，給養禽業帶來了巨大的經濟損失。目前在家禽養殖過程中都是通過接種疫苗來預防新城疫，但是隨著新城疫疫苗免疫密度的提高和廣泛應用，養殖成本進一步提升。同時，一些雞群盡管按照免疫程序開展了新城疫疫苗防疫，但是由于病毒免疫應答水平存在個體差異，仍然會出現非典型雞新城疫疫情。宿主對新城疫的抗性研究仍是一種挑戰，我們前期利用雞高密度單核苷酸多態性芯片進行全基因組關聯分析發現與雞新城疫病毒抗體水平密切相關的基因組區域，該基因組區域內的ROBO2基因上的突變與新城疫病毒抗體水平極顯著相關。該基因是影響雞對新城疫病毒免疫應答的候選基因。但目前從遺傳的角度來說，還沒有建立有關ROBO2基因作為雞新城疫病毒抗體水平分子標記的檢測方法，同時該基因作為雞新城疫病毒抗體水平分子標記輔助選擇也未見應用。?

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術缺陷，提供雞新城疫病毒抗體水平相關的分子標記及其鑒別方法和應用。?

本發明通過克隆與雞新城疫病毒抗體水平相關基因ROBO2的cDNA全長序?列，尋找該基因編碼區的突變位點以及相應的多態性檢測方法，通過性狀關聯分析的應用，為雞的標記輔助選擇提供有用的分子標記。另外本發明還涉及分子標記的鑒別方法以及在雞標記輔助選擇上的應用。?

本發明克隆得到與雞新城疫抗體水平相關基因ROBO2的全長cDNA序列，該全長cDNA序列包括完整的編碼區序列及3’UTR和5’UTR，如序列表SEQ?ID?NO：1所述，該序列全長為5269bp。?

本發明通過對上述克隆所獲得的cDNA片段分析，結果發現可作為雞標記輔助選擇應用的兩種分子標記，這兩種標記與雞新城疫病毒抗體水平相關。?

分子標記一的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：2所示，在該序列的第50位的G堿基突變為A堿基；該突變位點位于雞ROBO2基因的全長cDNA序列的1418bp處，如序列表SEQ?ID?NO：1所示。因此，為了方便表述，將標記一的G/A突變命名為1418G>A。?

分子標記二的核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO：3所示，在該序列的第167位堿基處T/C堿基突變。T堿基突變為C堿基，導致AluI-RFLP多態性；該突變位點位于雞ROBO2基因的全長cDNA序列的2462bp處，如序列表SEQ?ID?NO：1所示。因此，為了方便表述，將標記二的T/C突變命名為2462T>C。?

分子標記一（1418G>A）：以雞ROBO2基因的DNA序列（參考序列GeneBank登錄號為NC_006088.3）為模板，設計引物擴增該基因部分序列。擴增所得到的序列包括部分第5外顯子，如序列表SEQ?ID?NO：2所述，該序列全長為87bp。所用的引物為：?

RS-exon5-F：5'-AGGAGGAGGCCGTGGATTT-3'，?

RS-exon5-R：5'-TTGGCAGGTCTGCGTCAT-3'。?

分子標記二（2462T>C）：以雞ROBO2基因的DNA序列（參考序列GeneBank登錄號為NC_006088.3）為模板，設計引物擴增該基因部分序列。擴增所得到的序列包括完整的第12外顯子和部分第11內含子、部分第12內含子，如序列表SEQ?ID?NO：3所述，該序列全長為286bp。所用的引物為：?

RS-exon12-F：5'-TTTACTTCCTTGTTTTCTTG-3'，?

RS-exon12-R：5'-ACCTTCAGTTTCTTTCTTTC-3'。?

本發明的第二個目的是提供了兩種分子標記的鑒別方法。?