[發明專利]一種快速檢測血漿中豬附紅細胞體的膠體金試紙條

無效

• 申請號: 201310714094.4
• 申請日: 2013-12-21
• 公開（公告）號: CN103698522A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 劉建柱;孟凱
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及預防獸醫學檢驗領域，具體涉及了一種豬附紅細胞體的快速檢測膠體金試紙條。

背景技術

豬附紅細胞體病（eperythrozoonosis）是由豬附紅細胞體（Mycoplasma?suis,M.suis）寄生于豬紅細胞表面、血漿、骨髓及腦脊液所引起的一種人獸共患病，一般呈隱性感染，在豬群中的感染率高達90%以上，急性發病時一般表現為貧血、黃疸、發熱、淋巴結腫大、母豬流產等癥狀。附紅細胞體在伯杰氏手冊中被劃分為立克次氏體，但目前國際上根據對其16sRNA的序列的研究，普遍認為其屬于支原體。附紅細胞體是1928年被Schilling和Dinger同時在嚙齒類動物中發現；1932年Doyle等（1932）在印度報道了豬的附紅細胞體病；1950年Splitter(1950)正式命名引起豬黃疸型貧血病的附紅細胞體為豬附紅細胞體；據報道發現附紅細胞體對豬的感染率可達到90%（張守發等，2003）。迄今為止，該病遍布美、歐、亞、非等世界各地。上世紀八十年代在中國首次發現M.suis,近幾年引起大規模的爆發流行，給養豬業造成了巨大的經濟損失。長期以來，由于M.suis無法在體外進行長期連續培養（Nonaka?N等，1996）以及M.suis本身的一些特殊性，在很大程度上限制了對M.suis的研究。至今，還沒有該病的疫苗在生產或臨床中應用。

根據豬的臨床癥狀可對豬附紅細胞體病做出初步診斷，最后確診該病還有賴于實驗室檢查。目前，對M.suis的檢測方法主要方法有：（1）采用血液鏡檢技術：臨床上多以采集豬末梢血液壓滴玻片法或血液圖片染色鏡檢法來檢測血漿中和紅細胞上的附紅細胞體，但該方法準確性和敏感性均較低，主觀臆斷性大；（2）用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中的特異抗體，此方法比鏡檢法簡便、特異、敏感，但由于需要大量的試劑和儀器，需要專業技術人員的操作等因素，使得該方法不便于普遍推廣應用，尤其不適合基層人員的現場應用。因此，迫切需要研發一種比ELISA更簡便、快速而實用的豬附紅細胞體的快速診斷方法。

發明內容

針對現有技術存在的諸多不足之處，本發明提供了一種全新的膠體金試紙條，具體涉及了一種血漿中豬附紅細胞體的快速檢測膠體金試紙條，包括底層的支撐層和中間層的吸附層，吸附層固定在支撐層上，吸附層從測試端依次為樣品吸附纖維層、紅細胞過濾膜、金標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水材料層。在所述的纖維素膜層中部有一條包被抗豬附紅細胞體的單克隆抗體的檢測線和一條包被羊抗鼠IgG抗體或兔抗鼠IgG抗體的質控線，采用這種結構的試紙條具有特異性強，操作簡便、快速，結果顯示直觀、準確，減少投資和檢測成本，應用范圍廣等優點，能廣泛應用于基層對于豬附紅細胞體的檢測。

本發明所采用的具體技術方案是：

一種血漿中豬附紅細胞體的快速檢測膠體金試紙條，包括支撐層和吸附層，吸附層固定在支撐層上，吸附層從測試端依次為樣品吸附纖維層、紅細胞過濾膜、金標抗體纖維層、纖維素膜層及吸水材料層。在所述的纖維素膜層中部有一條包被抗豬附紅細胞體的單克隆抗體的檢測線和一條包被羊抗鼠IgG抗體或兔抗鼠IgG抗體的質控線，所述的纖維素膜層一端嵌入金標抗體纖維層，另一端嵌入吸水材料層中。

其中，所述的支撐層用不吸水的硬質塑料條制成；

所述的測試端的樣品吸附纖維層用玻璃纖維制成；

所述的金標抗體纖維層吸附有膠體金標記的高純度的抗豬附紅細胞體的單克隆抗體：豬附紅細胞體MSG1單克隆抗體；

所述的纖維素膜層用硝酸纖維素膜或純纖維素膜或聚偏二氟乙烯膜制成；

所述的吸水材料層用吸水紙制成；

上述的各種材料以及紅細胞過濾膜均為市購。

而檢測線中所采用的抗豬附紅細胞體的單克隆抗體為豬附紅細胞體MSG1單克隆抗體，該單克隆抗體利用2012年6月15日公開在中國知網碩士學位論文數據庫中的《應用重組MSG1蛋白檢測豬附紅細胞體抗體的ELISA方法的建立及其單克隆抗體的制備》的研究內容制備獲得的。

本發明所述膠體金試紙條的制備方法如下：具體步驟：