[發(fā)明專利]一種快速檢測血漿中豬附紅細(xì)胞體的膠體金試紙條

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310714094.4
• 申請日: 2013-12-21
• 公開（公告）號: CN103698522A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉建柱;孟凱
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種血漿中豬附紅細(xì)胞體的快速檢測膠體金試紙條，包括支撐層（8）和吸附層，吸附層固定在支撐層（8）上，其特征在于：吸附層從測試端依次為樣品吸附纖維層（1）、紅細(xì)胞過濾膜（2）、金標(biāo)抗體纖維層（3）、纖維素膜層（6）及吸水材料層（7），在所述的纖維素膜層（6）中部有一條包被抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體的檢測線（4）和一條包被羊抗鼠IgG抗體或兔抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線（5）；所述的纖維素膜層6一端嵌入金標(biāo)抗體纖維層（3），另一端嵌入吸水材料層（7）中；?

所述膠體金試紙條的制備方法如下：具體步驟：?

1）在纖維素膜層的不用位置上分別包被抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體和羊抗鼠或兔抗鼠IgG的二抗，分別形成檢測線和質(zhì)控線；具體步驟為：將包被濃度為0.5-2mg/ml的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體溶液按1-2ul/cm的速度噴于檢測層上作為檢測線，將包被濃度為0.5-2mg/ml的羊抗鼠或兔抗鼠IgG的二抗按1-2ul/cm的速度噴于檢測線下方的檢測層上作為質(zhì)控線，37℃下干燥30-60min，從而制備得到檢測線和質(zhì)控線；?

2）金標(biāo)抗體纖維層的制備，具體步驟為：以檸檬酸鈉還原法制備金溶液，即在100ml沸騰的0.01-0.02wt%氯金酸水溶液中加入1-3ml的0.1-1wt%檸檬酸三鈉溶液，可獲得直徑在10-25nm左右的膠體金；?

通過直接混合的方式以0.2mol/L的K₂CO₃溶液調(diào)節(jié)上述獲得的膠體金pH至8.0-9.5，以1：1000-1500的標(biāo)記比例將待標(biāo)記的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體加入到上述調(diào)整pH之后的膠體金中，標(biāo)記20min后，再向上述標(biāo)記后的膠體金溶液中加入10wt%的PEG10000水溶液；至PEG10000的終濃度為0.05-0.1wt%，4℃、3000rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，4℃、10000-13000rpm離心30min，棄上清液，獲得初步純化的金標(biāo)抗體；?

按mg/ml為1：10-1000的的比例用含0.1-2wt%BSA的0.001-0.2mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋膠體金標(biāo)記的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體，將上述稀釋后的金標(biāo)抗體液按50ul/cm²的速度噴于玻璃纖維素膜中，4℃低溫真空干燥；?

3）按前述順序采用現(xiàn)有工藝和設(shè)備組裝支撐層、纖維素膜層、金標(biāo)抗體纖維層、吸水材料層、紅細(xì)胞過濾膜和樣品吸附纖維層既得目標(biāo)試紙條。?

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于：所述的支撐層用不吸水的硬質(zhì)塑料條制成；所述的測試端的樣品吸附纖維層用玻璃纖維制成；所述的金標(biāo)抗體纖維層吸附有膠體金標(biāo)記的高純度的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體：豬附紅細(xì)胞體MSG1單克隆抗體；所述的纖維素膜層用硝酸纖維素膜或純纖維素膜或聚偏二氟乙烯膜制成；所述的吸水材料層用吸水紙制成。?

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于：所述檢測線中所采用的為抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體：豬附紅細(xì)胞體MSG1單克隆抗體。?

4.權(quán)利要求1所述膠體金試紙條的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：?

1）在纖維素膜層的不用位置上分別包被抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體和羊抗鼠或兔抗鼠IgG的二抗，分別形成檢測線和質(zhì)控線；具體步驟為：將包被濃度為0.5-2mg/ml的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體溶液按1-2ul/cm的速度噴于檢測層上作為檢測線，將包被濃度為0.5-2mg/ml的羊抗鼠或兔抗鼠IgG的二抗按1-2ul/cm的速度噴于檢測線下方的檢測層上作為質(zhì)控線，37℃下干燥30-60min，從而制備得到檢測線和質(zhì)控線；?

2）金標(biāo)抗體纖維層的制備，具體步驟為：以檸檬酸鈉還原法制備金溶液，即在100ml沸騰的0.01-0.02wt%氯金酸水溶液中加入1-3ml的0.1-1wt%檸檬酸三鈉溶液，可獲得直徑在10-25nm左右的膠體金；?

通過直接混合的方式以0.2mol/L的K₂CO₃溶液調(diào)節(jié)上述獲得的膠體金pH至?8.0-9.5，以1：1000-1500的標(biāo)記比例將待標(biāo)記的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體加入到上述調(diào)整pH之后的膠體金中，標(biāo)記20min后，再向上述標(biāo)記后的膠體金溶液中加入10wt%的PEG10000水溶液；至PEG10000的終濃度為0.05-0.1wt%，4℃、3000rpm離心30min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，4℃、10000-13000rpm離心30min，棄上清液，獲得初步純化的金標(biāo)抗體；?

按mg/ml為1：10-1000的的比例用含0.1-2wt%BSA的0.001-0.2mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋膠體金標(biāo)記的抗豬附紅細(xì)胞體的單克隆抗體，將上述稀釋后的金標(biāo)抗體液按50ul/cm²的速度噴于玻璃纖維素膜中，4℃低溫真空干燥；?

3）按前述順序采用現(xiàn)有工藝和設(shè)備組裝支撐層、纖維素膜層、金標(biāo)抗體纖維層、吸水材料層、紅細(xì)胞過濾膜和樣品吸附纖維層既得目標(biāo)試紙條。?