[發(fā)明專利]檢測MPL基因515位點突變類型的方法和引物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310712442.4
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103757100A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設計）人: 鄒媛;朱良俊;杜翠;陳紅梅;夏成青
• 申請（專利權）人: 鄭州艾迪康醫(yī)學檢驗所（普通合伙）
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黎雙華

1.用于檢測樣本中基因MPL?515位點突變類型的引物，其特征在于，所述引物包括用于擴增待檢MPL?515位點區(qū)段的一對擴增引物MPL-F和MPL-R，其核苷酸序列為：

MPL-F：5’-CGAAGTCTGACCCTTTTTGTCT-3’

MPL-R：5’-biotin-AGCGAACCAAGAATGCCTGT-3’。

2.如權利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物還包括一條用于焦磷酸測序的測序引物MPL-S，其核苷酸序列為：

MPL-S：5’-GTCCTGGGCCTGCTGCTGCTGAGG-3’。

3.如權利要求2所述的引物，其特征在于，依據(jù)所述測序引物能獲得MPL515位點野生型和各種突變型的測序結(jié)果序列：

MPL?W515野生型：TGGCAGTTT

MPL?W515L純合突變型：TTGCAGTTT

MPL?W515K純合突變型：AAGCAGTTT

MPL?W515A純合突變型：GCGCAGTTT

MPL?W515R純合突變型：CGGCAGTTT

MPL?W515S純合突變型：TCGCAGTTT

MPL?515W/L雜合突變型：TGCCAAGGTTTTTT

MPL?515W/K雜合突變型：TGGACGACGATTTG

MPL?515W/R雜合突變型：CTGGGGCCAAGGTTTTTT

MPL?515W/S雜合突變型：TGGCGACGATTTG

MPL?515W/A雜合突變型：TGCGACGATTTG。

4.如權利要求3所述的引物，其特征在于，依據(jù)所述測序引物在基因MPL?515中的結(jié)合位置和所述測序結(jié)果序列，確定標準比對序列，所述標準比對序列核苷酸序列如下：

MPL?W515野生型：TG₂CAGT₃

MPL?W515L純合突變型：T₂GCAGT₃

MPL?W515K純合突變型：A₂GCAG

MPL?W515A純合突變型：GCGCAG

MPL?W515R純合突變型：CG₂CAGT₃

MPL?W515S純合突變型：TCGCAG

MPL?515W/L雜合突變型：tgC₂A₂G₂T₆

MPL?515W/K雜合突變型：TG₂aCgAcGaT₃g

MPL?515W/R雜合突變型：ctG₄C₂A₂G₂T₆

MPL?515W/S雜合突變型：tG₂cgAcGaT₃g

MPL?515W/A雜合突變型：TgcgAcGaT₃g

其中C或c、T或t、G或g、A或a代表4種堿基；堿基右下角數(shù)字代表峰高比例。

5.一種檢測基因MPL?515位點突變類型的方法，包括以下步驟：

(1)提取血液樣本中的DNA；

(2)利用一對擴增引物MPL-F和MPL-R對(1)中的DNA進行PCR擴增，獲得擴增產(chǎn)物；

(3)對(2)中的擴增產(chǎn)物進行純化，得到單鏈核苷酸模板；

(4)利用測序引物MPL-S對(3)中的單鏈核苷酸模板進行焦磷酸測序，獲得焦磷酸測序結(jié)果；

(5)將(4)中的焦磷酸測序結(jié)果與標準比對序列進行比對，確定基因MPL?515位點的突變類型，其特征在于，

MPL-F：5’-CGAAGTCTGACCCTTTTTGTCT-3’

MPL-R：5’-biotin-AGCGAACCAAGAATGCCTGT-3’

MPL-S：5’-GTCCTGGGCCTGCTGCTGCTGAGG-3’。