[發明專利]一種檢測液體中內毒素含量的方法

有效

• 申請號: 201310712306.5
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103675051A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 繆鵬;王弼陡;羅剛銀;錢慶;王鐘周;程文播
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

1.一種檢測液體中內毒素含量的方法，包括以下步驟：

步驟1)將含飽和鱟C因子的水溶液加入到待測液體中，得到一混合液，待測液體中的內毒素能夠激活所述鱟C因子，產生活性鱟C因子；

步驟2)將經過修飾的電極插入到所述混合液中，電極表面與所述活性鱟C因子發生酶切反應，電極表面的電化學性質被改變；隨后取出電極，插入到另一含電化學活性物質的電解液中，測該電極對所述電解液的電化學響應值；

步驟3)配制至少三個含特定濃度的內毒素標準液，按照步驟1)和2)進行操作后得到相應的至少三組電化學響應值，并將所得電化學響應值繪成標準曲線；將步驟2)中所得電化學響應值與所述標準曲線進行比對，從而得出所述待測液體的內毒素含量；

其特征在于，步驟1)中所用鱟C因子是采用基因重組的方法制得。

2.根據權利要求1所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，步驟1)中所用鱟C因子是采用以下方法制得：從鱟的血液中提取出RNA，逆轉錄出鱟C因子的DNA，在原核表達系統或真核表達系統中重組表達出鱟C因子，并對重組表達出的鱟C因子進行純化。

3.根據權利要求2所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，重組表達出的鱟C因子采用透析法、超濾法、鹽析法、密度梯度離心法、電泳法、離子交換層析法、親和層析法或低溫有機溶劑沉淀法中的任意一種方法進行純化。

4.根據權利要求1所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，步驟2)中所用電極在插入到所述混合液之前，電極表面修飾有包含鱟三肽的多肽序列。

5.根據權利要求4所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，所述多肽序列所含氨基酸數量為5～50個；所述多肽序列配成溶液修飾到電極表面上，所述多肽序列的濃度為0.1μM～100mM；修飾電極的方法采用吸附固定法、共價鍵合法或交聯法中的任意一種。

6.根據權利要求1所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，所述電極為金電極或碳電極。

7.根據權利要求1所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，所述電解液中電化學活性物質選自鐵氰化鉀、亞鐵氰化鉀、釕或其配合物、吩惡嗪衍生物或具有電化學性質的納米材料中的任意一種，所述電解液中電化學活性物質的濃度為0.1mM～100mM。

8.根據權利要求7所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，測試電化學響應所用方法選自循環伏安法、計時電量法或示差脈沖伏安法中的任意一種。

9.根據權利要求1～8中任何一項所述的檢測液體中內毒素含量的方法，其特征在于，所述電極表面的反應溫度為37.0±1℃，所述酶切反應的反應時間為10min～3h。