[發(fā)明專利]雞NK-lysin基因及其克隆方法和表達方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310711614.6 | 申請日： | 2013-12-20 |
| 公開（公告）號： | CN103710350A | 公開（公告）日： | 2014-04-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐前明;王貴軍;徐穎;彈啟東;劉思嘉 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12;C12N15/10;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 230036 安徽省合肥市*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | nk lysin 基因 及其 克隆 方法 表達 | ||
1.雞NK-lysin基因，其特征在于其序列如序列表SEQ?ID?No.1所示。
2.雞NK-lysin基因的克隆方法，其特征在于采用下述引物進行PCR擴增：上游引物，3’-GTGAAATTCAAGTGCCCCTCA-5’；下游引物，3’-GCCGGTGCAGTAAATGATGATCTCC-5’。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的克隆方法，其特征在于還包括將PCR產(chǎn)物用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的克隆方法，其特征在于還包括將PCR產(chǎn)物利用膠回收試劑盒進行回收純化的步驟。
5.雞NK-lysin基因的鑒定方法，其特征在于采用pMD-19T作為載體構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD-19T-NK-lysin，并轉(zhuǎn)化到宿主菌大腸桿菌DH5α中進行表達，將陽性克隆進行序列鑒定。
6.雞NK-lysin基因的表達方法，其特征在于采用pET-32a作為載體在連接酶催化下進行連接反應(yīng)構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-32a-NK-lysin，并轉(zhuǎn)化到宿主菌大腸桿菌Rossetta中采用IPTG進行誘導(dǎo)表達。
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