[發(fā)明專利]用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310711267.7
• 申請(qǐng)日: 2013-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN103713130A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唱?jiǎng)P;陳鳴;皮燕;鄧少麗;魯衛(wèi)平;王豐;賈雙榮;李發(fā)科
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N29/00
• 代理公司: 北京元本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器，包括壓電基底（1）、反射柵陣列和叉指換能器，其特征在于：所述壓電基底（1）上依次附著有鉻膜（2）和金膜（3），所述金膜（3）表面包被有適配子（4），所述適配子（4）為堿基序列如ＳＥＱＩＤＮＯ：1所示的單鏈寡核苷酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器，其特征在于：所述適配子（4）最小自由能為-5.20kcal/mol。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器，其特征在于：所述壓電基底（1）采用Y36°切X傳方向的LiTaO₃晶體制成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器，其特征在于：所述金膜（3）厚度為40nm。

5.權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A、生物傳感器的預(yù)處理：金膜表面在包被適配子前，對(duì)其進(jìn)行清潔處理，去除金膜表面的雜質(zhì)；

B、適配子的預(yù)處理：所述適配子在95℃變性5min，然后迅速冰浴5min；

C、適配子的包被：采用巰基法將適配子固定于金膜表面，再用6-巰基-1-己醇對(duì)未與適配子結(jié)合的金膜進(jìn)行封閉處理。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述步驟A生物傳感器的預(yù)處理是金膜表面在包被適配子前，先后分別用Piranha溶液、1mol/L?NaOH和1mol/L?HCl各浸泡生物傳感器金膜10min，然后用磷酸鹽緩沖液和去離子水分別清洗生物傳感器3次，氮?dú)獯蹈伞?/p>

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述步驟B適配子的預(yù)處理是將適配子溶解于包含10mmol/L?Tris-HCl、1mmol/L?EDTA、1mol/L?NaCl和1mmol/L?TCEP的緩沖液中，并在95℃變性5min，然后迅速冰浴5min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述步驟C適配子包被時(shí)，適配子的濃度為2μmol/L，包被操作于4℃反應(yīng)24h。

9.快速檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、將權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器表面的適配子與循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交反應(yīng)，反應(yīng)條件為在包含Ca²⁺和Mg²⁺的磷酸鹽緩沖液中，于37℃反應(yīng)30min，所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4；

b、由生物傳感器的相位變化獲取循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

10.堿基序列如ＳＥＱＩＤＮＯ：1所示的單鏈寡核苷酸在用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞快速檢測(cè)的適配子型生物傳感器中的應(yīng)用。