[發(fā)明專利]一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310705625.3
• 申請(qǐng)日: 2013-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN104711232B
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張耀洲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 特菲（天津）生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/02
• 分類號(hào): C12N7/02;C12R1/93
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33228
• 代理人: 沈亞芳

1.一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法，其特征在于：以感染了重組桿狀病毒NPV-gp64-HA的蠶蛹為原料，與無菌水進(jìn)行混合后進(jìn)行勻漿，取勻漿液低速離心，取低速離心的稠狀溶液高速離心，取高速離心的上清用0.1μm膜包超濾，取截留液超速離心，得到黑團(tuán)用超濾液重懸過夜，蔗糖密度梯度離心，然后取區(qū)帶后活性高的樣品，300KD膜包超濾，0.22μm濾膜過濾，收集截留液，獲得表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的病毒粒子；所述HA蛋白序列如SEQ ID NO :10所示；

所述低速離心速率為8000rpm；所述高速離心的速率為15000rpm；所述超速離心的速率為50000 rpm；所述蔗糖密度梯度離心的速率為22000rpm。

2.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法，其特征在于：所述蠶蛹與無菌水混合的質(zhì)量比為1：3。

3.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法，其特征在于：所述低速離心在20℃的溫度條件下進(jìn)行；所述高速離心在4℃的溫度條件下進(jìn)行；所述超速離心在10℃的溫度條件下進(jìn)行。

4.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法，其特征在于：所述蔗糖密度梯度離心所用蔗糖密度為30%蔗糖、55%蔗糖。

5.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法，其特征在于：所述區(qū)帶后活性高的樣品在超濾之前，用1：4000的β-丙內(nèi)酯，4℃滅活24小時(shí)，37℃水解4小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求 1所述的一種表面展示有H5N1流感病毒HA蛋白的家蠶重組桿狀病毒的純化方法，其特征在于：所述超濾液制備方法為取NaCl 85g、Na₂HPO₄ 70g、NaH₂PO₄ 3.4g、EDTA 4g、檸檬酸鈉50g倒入裝有純化水的燒杯中，溶解后用量筒定容至1L。