[發明專利]一種蛋白質產品重復利用的方法

在審

• 申請號: 201310705054.3
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN104725464A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 鄭春楊;王永宏;馮建敏;張琳;王琳
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: C07K1/113
• 分類號: C07K1/113;C07K1/18
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種蛋白質產品重復利用的方法，包括將蛋白質PEG修飾，待活性降低，產品超過有效期后，將其徹底做變性處理，并重折疊的步驟。

2.根據權利要求1所述蛋白質產品重復利用的方法，其中：

非特異氨基修飾：將甲基對硫磷水解酶加入緩沖液I進行溶解，調節pH至7-9，加入聚乙二醇修飾劑，蛋白和聚乙二醇修飾劑摩爾比為1∶5-1∶50。所述緩沖液I為0.02-0.2mol/LTris-Cl或磷酸鹽緩沖液(PB)，pH7-9，恒溫狀態下，4℃-37℃進行修飾；

N端氨基修飾：將甲基對硫磷水解酶加入緩沖液II進行溶解，調節pH至4-6，加入聚乙二醇修飾劑，蛋白和修飾劑摩爾比為1∶1-1∶10；所述緩沖液II為0.02-0.2mol/L?NaAc-HAc或磷酸鹽緩沖液，pH4-6，恒溫狀態下，4℃-37℃進行修飾；

或，巰基修飾：將甲基對硫磷水解酶加入緩沖液III進行溶解，調節pH至7-9，加入聚乙二醇修飾劑，蛋白和修飾劑摩爾比為1∶1-1∶10；所述緩沖液III為0.02-0.2mol/L?Tris-Cl或硼酸-硼砂緩沖液，pH7-9，恒溫狀態下，4℃-37℃進行修飾。

所述PEG修飾甲基對硫磷水解酶的方法中，非特異氨基修飾所用的聚乙二醇修飾劑為mPEG-SC5000、mPEG-SC10000、mPEG-SC20000；N端氨基修飾所用聚乙二醇修飾劑為mPEG-ALD5000、mPEG-ALD10000、mPEG-ALD20000；或，巰基修飾所用的聚乙二醇修飾劑為mPEG-MAL5000、mPEG-MAL10000、mPEG-MAL20000。

3.根據權利要求1所述蛋白質產品重復利用的方法，其中，修飾時間為3-24小時。

4.根據權利要求1所述蛋白質產品重復利用的方法，其中，修飾后的蛋白采用離子交換層析DEAE?Sepharose6FF或Q?Sepharose6FF純化修飾組分，流動相為0.05-0.2mol/L?Tris-HCl或磷酸鹽緩沖液pH6-9.5，添加0-1.5M氯化鈉。

5.根據權利要求1所述蛋白質產品重復利用的方法，其中，變性方法，使用變性劑6M鹽酸胍或8M尿素和過量的還原劑處理，使蛋白質分子從原來有序的卷曲的緊密結構變為無序的松散的伸展狀結構。復性方法，將變性蛋白與稀釋復性緩沖液混合，放置過夜，通過降低變性劑和還原劑的含量，逐步恢復蛋白質分子活性。