[發(fā)明專利]一種從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310702909.7
• 申請(qǐng)日: 2013-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN103755589A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高合意;虞功亮;李仁輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院水生生物研究所
• 主分類號(hào): C07C251/20
• 分類號(hào): C07C251/20;C07C249/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和資源利用與可持續(xù)發(fā)展領(lǐng)域，更具體涉及一種從微囊藻提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法。

背景技術(shù)

目前，對(duì)微囊藻的利用幾乎是空白，更不用說從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸并加以利用了。

類菌胞素氨基酸（mycosporine?and?mycosporine-like）是一大類以環(huán)己烯酮為基本骨架,與不同類型氨基酸通過縮合作用形成的水溶性物質(zhì)，能在真菌、海洋細(xì)菌、藍(lán)藻和真核藻類細(xì)胞中合成，并在海生無脊椎動(dòng)物和魚類等生物體內(nèi)積累，其分子大小一般小于400Da，這類物質(zhì)在310-360nm范圍內(nèi)具有很強(qiáng)的光吸收能力。很多微囊藻都含有類菌胞素氨基酸，他們能幫助微囊藻抵抗紫外線的侵襲，為微囊藻的生長創(chuàng)造條件。類菌胞素氨基酸這類具有極強(qiáng)的抗紫外輻射的能力，可用于光保護(hù)行業(yè)，特別是化妝品行業(yè)。目前，我國使用的光保護(hù)物質(zhì)主要是化學(xué)合成，長期使用化學(xué)合成物質(zhì)對(duì)人體皮膚容易造成傷害，從而不利于人類健康。

而且，目前國內(nèi)對(duì)類菌胞素氨基酸的提取涉及很少，并且純度不高。特別是目前世界范圍內(nèi)都沒有商品的類菌胞素氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法，該方法簡單，操作方便，安全可靠。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供了一種從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法在制備的類菌胞素氨基酸Shinorine中的應(yīng)用。通過該方法，得到的最終產(chǎn)品的純度達(dá)到85%-95%，可以作為標(biāo)準(zhǔn)品使用，或其他商品化用途，為后續(xù)大規(guī)模提取定量打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施：

一種從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法，具體步驟如下：

1.將微囊藻粉與無水甲醇以1g：10-40ml的比例進(jìn)行混合，先置于超聲清洗儀中100%超聲處理5-10min，然后置于40-50℃的水浴鍋中處理2.5-4小時(shí)，期間上下混勻數(shù)次，9000-11000rpm/min條件下離心，離心15-20min，取上清；濾渣以上述微囊藻粉與無水甲醇的比例重新加入無水甲醇抽提，重復(fù)抽提2～3次，將收集的上清合并；

2.將收集的上清液置于氮吹儀中，氮?dú)獯蹈桑哉麴s水與藻粉重量比為1:1～5:1加入蒸餾水復(fù)溶；

3.在復(fù)溶后溶液中加入等體積的氯仿，充分混勻；

4.以9000-11000rpm/min的條件下離心15-20min，收集上清液；

5.上清液過0.22μm針式過濾器，收集濾液；

6.濾液再經(jīng)過strata-x固相萃取小柱處理，收集的濾液在-50～-60℃下冷凍干燥后稱重。

本發(fā)明所用試劑或材料市售的均可使用，步驟6中用固相萃取小柱處理濾液時(shí)，可依據(jù)常規(guī)方式處理，或選擇以下處理方式，步驟如下：

a：活化，先使用10-40ml的無水甲醇，然后使用10-40ml超純水活化小柱，流速為2-5ml/min；

b：上樣：上樣前樣品溶液中加入0.2m/L的NaOH溶液，使樣品pH值到6.5-8.0；

c：淋洗：先使用無水甲醇20-60ml，再使用超純水活化20-60ml；流速為2-5ml/min；

d：洗脫：洗脫溶液使用0.1%（v:v）HCl甲醇10-20ml（所用HCL濃度為1m/l），流速2-5ml/min；

e：收集的濾液在-50～-60℃下冷凍干燥后稱重。

優(yōu)選的，在步驟d中的洗脫溶液總體積不變的情況下，進(jìn)行兩次相同條件洗脫。

優(yōu)選的，上樣時(shí)不施加壓力，使溶液自然流下。

所述的微囊藻可通過常規(guī)方式進(jìn)行培養(yǎng)，也可通過本發(fā)明所述方式進(jìn)行，具體培養(yǎng)步驟如下：

1.培養(yǎng)液的配制：常規(guī)藍(lán)藻培養(yǎng)基；

2.微囊藻的培養(yǎng)：

（1）一級(jí)培養(yǎng)：由試管原種接種到250ml的培養(yǎng)瓶中，通氣培養(yǎng)，調(diào)節(jié)氣流到1-2L/min，氣流經(jīng)過針頭式過濾器（0.22μm）無菌處理連接，光強(qiáng)控制在40-60μEm^-2s^-1，溫度控制在25-28℃，當(dāng)培養(yǎng)5-8天后，轉(zhuǎn)入二級(jí)培養(yǎng)；

（2）二級(jí)培養(yǎng)：將一級(jí)培養(yǎng)所得的培養(yǎng)物接入到2L培養(yǎng)瓶中，通氣培養(yǎng)，調(diào)整氣流到3-4L/min，氣流經(jīng)過針頭式過濾器（0.22μm）無菌處理連接，光強(qiáng)控制在60-80μEm^-2s^-1，溫度控制在25-28℃，當(dāng)培養(yǎng)5-10天后，轉(zhuǎn)入三級(jí)培養(yǎng)；