[發明專利]一種從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法

有效

• 申請號: 201310702909.7
• 申請日: 2013-12-19
• 公開（公告）號: CN103755589A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 高合意;虞功亮;李仁輝
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C07C251/20
• 分類號: C07C251/20;C07C249/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種從微囊藻中提取類菌胞素氨基酸Shinorine的方法，具體步驟如下：

1）將微囊藻粉與無水甲醇以1g：10-40ml的比例進行混合，先置于超聲清洗儀中100%超聲處理5-10min，然后置于40-50℃的水浴鍋中處理2.5-4小時，期間上下混勻數次，9000-11000rpm/min條件下離心，離心15-20min，取上清；濾渣以上述微囊藻粉與無水甲醇的比例重新加入無水甲醇抽提，重復抽提2~3次，將收集的上清合并；?

2）將收集的上清液置于氮吹儀中，氮氣吹干，以蒸餾水與藻粉重量比為1:1~5:1加入蒸餾水復溶；

3）在復溶后溶液中加入等體積的氯仿，充分混勻；

4）以9000-11000rpm/min的條件下離心15-20min，收集上清液；

5）上清液過0.22μm針式過濾器，收集濾液；

6）濾液再經過strata-x固相萃取小柱處理，收集的濾液在-50~-60℃下冷凍干燥后稱重。

2.根據權利要求1所述的方法，固相萃取的具體步驟為：

活化：先使用10-40ml的無水甲醇，然后使用10-40ml超純水活化小柱，流速為?2-5ml/min；

上樣：上樣前樣品溶液中加入0.2m/L的NaOH溶液，使樣品pH值到6.5-8.0；

淋洗：先使用無水甲醇20-60ml，再使用超純水活化20-60ml；流速為2-5ml/min；

洗脫：洗脫溶液使用0.1%體積比的HCl甲醇10-20ml，流速2-5ml/min，收集的濾液在-50~-60℃下冷凍干燥后稱重，所述HCL濃度為1m/l。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：在洗脫溶液總體積不變的情況下，洗脫兩次。

4.根據權利要求1或2所述的方法，微囊藻的培養方法如下：

A.?培養液的配制：常規藍藻培養基；

B.?微囊藻的培養：?

（1）一級培養：由試管原種接種到250ml的培養瓶中，通氣培養，調節氣流到1-2L/min，氣流經過針頭式過濾器無菌處理連接，光強控制在40-60μEm^-2s^-1，溫度控制在25-28℃，當培養5-8天后，轉入二級培養；

（2）二級培養：將一級培養所得的培養物接入到2L培養瓶中，通氣培養，調整氣流到3-4L/min，氣流經過針頭式過濾器無菌處理連接，光強控制在60-80μEm^-2s^-1，溫度控制在25-28℃，當培養5-10天后，轉入三級培養；

（3）三級培養：將二級培養所得的培養物轉移到10L的培養瓶中，通氣培養，調整氣流到4-6L/min，氣流經過針頭式過濾器無菌處理連接，光強控制在80-100μEm^-2s^-1，溫度控制在25-28℃，培養8-10天。

5.權利要求1所述方法在制備的類菌胞素氨基酸Shinorine中的應用。