[發明專利]一種基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法

無效

• 申請號: 201310702881.7
• 申請日: 2013-12-20
• 公開（公告）號: CN103713138A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 張何;傅昕;胡鑫江
• 申請（專利權）人: 湖南工程學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)生物素修飾的腺苷核酸適配體和生物素修飾的酪蛋白通過生物素-親合素結合方法固定于親合素修飾微球的表面形成功能化微球，所述微球固定在微流控芯片檢測區的相應微型小室中，形成微流控微珠陣列檢測芯片；

(2)將辣根過氧化物酶和巰基修飾的捕獲探針修飾到納米顆粒上作為信號標記；

(3)將步驟(2)形成的功能化納米顆粒流入微流控微珠陣列檢測芯片的檢測區與微珠陣列雜交，洗脫后流入腺苷溶液與雜交微球孵育；

(4)流入過氧化物酶底物溶液，通過多酶納米信號放大技術將生物素化的酪胺結合到微球表面的酪蛋白上，洗脫后流入親合素標記的量子點，所述量子點能與微球表面酪蛋白上結合的生物素識別并固定；

(5)通過計算流入腺苷后微球表面熒光與未流入腺苷微球表面熒光的比值對腺苷進行定性和定量。

2.根據權利要求1所述的基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于：步驟(1)中所述的功能化微球表面修飾的生物素修飾的腺苷核酸適配體和生物素修飾的酪蛋白，其摩爾濃度比值為1∶100～1∶120。

3.根據權利要求1所述的基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于：步驟(1)中所述的微球是二氧化硅微球、聚苯乙烯類有機聚合物微球、磁性微球和生物大分子聚合物微球中的任意一種。

4.根據權利要求1所述的基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于：步驟(2)中所述的納米顆粒為金納米顆粒、二氧化硅納米顆粒和聚苯乙烯納米顆粒中的任意一種。

5.根據權利要求1所述的基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于：步驟(3)中所述的腺苷溶液與雜交微球孵育，孵育時間為20～25min。

6.根據權利要求1所述的基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于：步驟(4)中所述的過氧化物酶底物溶液包含0.007％～0.009％H₂O₂、250～350μM生物素化的酪胺、50～100mM的NaCl。

7.根據權利要求1所述基于微流控芯片和核酸適配體識別技術的腺苷檢測方法，其特征在于：步驟(4)中所述的量子點為CdSe、CdTe、CdS和復合型量子點中的一種，其發射范圍為400nm～700nm。