[發明專利]對氧磷酶1基因的表達純化方法在審
| 申請號： | 201310701927.3 | 申請日： | 2013-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN104726497A | 公開（公告）日： | 2015-06-24 |
| 發明（設計）人： | 張耀洲;譚淑敏;李杰;王小飛;蓋其靜 | 申請（專利權）人： | 天津耀宇生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/866 | 分類號： | C12N15/866;C12N15/55;C12N9/16 |
| 代理公司： | 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228 | 代理人： | 孫艷敏 |
| 地址： | 300457 天津市濱海新區經濟技術開發區*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 氧磷酶 基因 表達 純化 方法 | ||
1.一種對氧磷酶1基因的表達純化方法，其特征在于，步驟如下：
（1）擴增對氧磷酶1基因，連接到轉移載體pFastBacTM1上構建重組轉移載體，重組轉移載體轉化大腸桿菌DH10Bac感受態細胞，獲得含有對氧磷酶1基因的重組桿狀病毒DNA，將重組桿狀病毒DNA轉染家蠶BmN細胞使其在細胞內復制裝配成含對氧磷酶1基因的重組病毒；
（2）步驟（1）的重組病毒接種家蠶五齡幼蟲，發病后取蠶血，經離心過濾除雜并經濃縮后用汽巴藍親和層析以及抗體親和層析純化蠶血，獲得對氧磷酶1蛋白。
2.根據權利要求1所述的對氧磷酶1基因的表達純化方法，其特征在于，步驟（1）所述擴增使用的引物核苷酸序列如SEQ?ID?NO:?1~2所示。
3.根據權利要求1所述的對氧磷酶1基因的表達純化方法，其特征在于，步驟（2）所述離心為4℃條件下以10000?rpm的轉速離心30?min；所述過濾除雜是采用9層醫用紗布過濾后再經過0.45μm濾膜；所述濃縮是用10?kD超濾管進行。
4.根據權利要求1所述的對氧磷酶1基因的表達純化方法，其特征在于，步驟（2）所述汽巴藍親和層析使用的固定相為汽巴藍瓊脂糖-3GA3000-CL。
5.根據權利要求1所述的對氧磷酶1基因的表達純化方法，其特征在于，步驟（2）所述抗體親和層析所用抗體是通過原核表達的對氧磷酶1基因四次免疫新西蘭雄兔后取血然后通過ProteinA純化制得。
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