[發明專利]狹顱田鼠DNA序列

無效

• 申請號: 201310701606.3
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103695546A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 張曉龍;姚李四;慈穎;喬舜;王海玲;房健慧;田麗;魏懷波
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/12;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及狹顱田鼠種類分子鑒定，具體涉及狹顱田鼠DNA序列。

背景技術

狹顱田鼠（Microtus?gregalis）隸屬于倉鼠科（Cricetidae），田鼠屬（Microtus）。狹顱田鼠多數為小型鼠類，棲息于草原地區，群居；國外分布于俄羅斯、蒙古；國內分布于新疆、內蒙古、河北、山西等地。狹顱田鼠數量多時可危害草原，降低草地產量。狹顱田鼠可傳播鼠疫、土拉倫斯病及蜱性斑疹傷寒等疾病。

長期以來，對鼠類的鑒定主要依靠形態學特征來實現，但近幾年，隨著DNA測序等技術的進步，人們陸續采用分子生物學方法對鼠類的DNA進行研究，以期建立新的分類方法，與傳統分類方法相互作證。

線粒體COI基因是鼠類鑒定研究中應用最為廣泛的分子標記，就目前而言，鼠類分子鑒定研究在國內研究較少，本發明意在提供一種快速鑒定狹顱田鼠的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供狹顱田鼠的DNA序列。狹顱田鼠DNA序列的獲得，可為該種的快速鑒定提供科學依據。

為實現上述目的，本發明通過如下技術方案實現：

通過試劑盒提取滿洲里地區的狹顱田鼠的DNA序列，然后由合成的引物擴增該狹顱田鼠的COI基因，PCR產物序列送由專業生物公司測定。測序結果通過手工校對，并用Mega4.0軟件進行相似性分析，確保所得序列為目標序列。所述狹顱田鼠的COI基因序列如SEQ?ID?No：1所示。

本發明提供一種用于檢測狹顱田鼠的DNA標準基因，其特征在于該基因為COI基因，具有如SEQ?ID?NO：1所示的基因序列。

本發明還提供一種檢測狹顱田鼠的DNA標準基因的引物，其特征在于該引物序列為：

正向引物5’ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3’；

反向引物5’CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3’。

本發明還提供一種用于檢測狹顱田鼠的試劑盒，其特征在于包括上述的引物。

本發明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，包括：

1）從待測的鼠類肝臟中分離提取DNA；

2）以該DNA為模板，采用上述引物進行擴增；

3）鑒定擴增所得序列，如果該序列與SEQ?ID?NO：1的同源性在98%以上，即可判斷所測田鼠為狹顱田鼠。

本發明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中步驟2）中：

采用聚合酶鏈式反應擴增模板。

本發明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中步驟3）中：

所述鑒定包括取適量步驟2）擴增出的產物用瓊脂糖電泳分離，經染色劑Goldview染色后于凝膠成像系統檢測，根據擴增產物的大小判定結果，如果能特異性擴增出720bp左右的條帶，則進行測序分析。

本發明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中擴增體系為：

本發明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中擴增反應程序為：

預變性94℃5min，35個循環，其中變性94℃30s、退火55℃40s、延伸72℃60s，最后延伸72℃10min。

本發明還提供一種狹顱田鼠的分子鑒定方法，其中：

取5μL?PCR擴增產物，用1%瓊脂糖凝膠電泳，130V電壓，電泳35min，染色劑Goldview染色，凝膠成像系統檢測。

本發明還提供一種快速鑒定狹顱田鼠的方法，其特征在于：

采用傳統的形態學鑒定與分子鑒定方法相結合。

本發明采用傳統的形態學鑒定與分子分類方法相結合，對所述狹顱田鼠進行鑒定，可確保物種鑒定的準確性和可靠性。

附圖說明

圖1為本發明的狹顱田鼠COI基因PCR擴增結果電泳鑒定圖。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。

實施例1

1、標本的采集與保存

采用鼠夾法進行標本采集，采獲的標本經酒精消毒后直接解剖，取其肝臟保存于75%酒精中帶回。

2、DNA模板制備

采用TIANGEN?DP304-03試劑盒提取狹顱田鼠DNA，提取的DNA樣品于-80℃保存備用。

3、引物合成

本實施例所用引物如下：

正向引物5’ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3’