[發明專利]一種利用常壓室溫等離子體制備微生物感受態細胞的方法

有效

• 申請號: 201310700136.9
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103710335A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 畢鮮榮;王立言
• 申請（專利權）人: 無錫思清源生物科技有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 吳泳歷

1.一種利用常壓室溫等離子體制備微生物感受態細胞的方法，其特征在于，制備時，使微生物細胞懸浮液經等離子體照射，收集，即得感受態細胞。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述等離子體為常壓室溫等離子體，由ARTP誘變育種系統采用裸露金屬電極在大氣壓、室溫條件下產生的均勻輝光放電等離子體。

3.根據權利要求書2所述的方法，其特征在于，所述ARTP誘變育種系統，以氦氣、氬氣、氮氣、氧氣、空氣或其混合氣體為氣源。

4.根據權利要求書2所述的方法，其特征在于，所述ARTP誘變育種系統的參數為：所述氣源為氦氣、氬氣或其混合氣體，氣體流量設定為3～30SLM，功率為50～150W。

5.根據權利要求書4所述的方法，其特征在于，所述氣體流量設定為5～15SLM、功率為80～120W。

6.根據權利要求書5所述的方法，其特征在于，所述液體循環系統通過蠕動泵調整流速，每個循環處理時間為0～20s。

7.根據權利要求書6所述的方法，其特征在于，每個循環處理時間為5～15s；所述微生物細胞懸浮液為細菌細胞懸浮液、放線菌細胞懸浮液、真菌細胞懸浮液、藻類細胞懸浮液或藻類原生質體細胞懸浮液。

8.權利要求書1-7任一所述方法包括如下步驟：

1）從微生物生長的固體平板上挑選新活化的微生物單菌落接種于液體培養基中，震蕩培養過夜，得菌液；

2）將步驟1）獲得的菌液接種于新更換的液體培養基中，震蕩培養至菌液OD₆₀₀為0.3～1.0；

3）將步驟2）震蕩所得菌液加入無菌離心管中，離心，棄上清，保留沉淀菌體；

4）用無菌的0.1mol/L?CaCl₂水溶液重懸步驟3）離心分離的菌體；

5）用所述的等離子體處理步驟4）獲得的菌體；

6）收集步驟5）經等離子體處理后的菌體，即為感受態細胞。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟2）中，所述菌液OD₆₀₀為0.5～0.7；所述菌液的接種量為5%～15%。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟3）中，所述的離心，轉速4000～10000r/min，離心時間0.5～2.0min。