[發(fā)明專利]一種催化效率提高的葡萄糖氧化酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310699636.5
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103614350A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳堅;聞一凡;張娟;堵國成;顧磊;劉曉筱
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種葡萄糖氧化酶突變體，是以SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列為出發(fā)序列，將催化活性中心的甲硫氨酸突變?yōu)榱涟彼帷?

2.根據(jù)權利要求1所述的葡萄糖氧化酶突變體，其特征在于，是將第524位的甲硫氨酸M突變?yōu)榱涟彼酟，突變后的葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。?

3.編碼權利要求2所述葡萄糖氧化酶突變體的核苷酸。?

4.攜帶權利要求3所述核苷酸的載體、基因工程菌或轉基因細胞系。?

5.根據(jù)權利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，是以畢赤酵母（Pichia?pastoris）GS115為宿主，以pPIC9K為載體，表達編碼所述葡萄糖氧化酶突變體的基因。?

6.構建權利要求5所述基因工程菌的方法，其特征在于，是通過PCR或化學合成得到編碼突變體的核苷酸序列，連接表達載體pPIC9K獲得重組質粒，將重組質粒轉化P.pastoris?GS115，獲得基因工程菌。?

7.應用權利要求5所述基因工程菌發(fā)酵生產葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）將攜帶突變基因的基因工程菌活化后，在30℃、200rpm下培養(yǎng)至OD₆₀₀=1.6-1.7，作為種子液；（2）將種子液以2%的接種量轉入基本發(fā)酵培養(yǎng)基，于30℃、200rpm條件下發(fā)酵培養(yǎng)；（3）當在基本發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)至OD₆₀₀=1.2-1.5時，收集菌體，將酵母細胞轉入誘導培養(yǎng)基中誘導蛋白的產生。?

8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，所述基本發(fā)酵培養(yǎng)基為：胰蛋白胨20g/L，酵母抽提物10g/L，甘油10mL/L，YNB13.4g/L，100mM/L?pH6.0的磷酸緩沖液。?

9.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，所述誘導培養(yǎng)基為：胰蛋白胨20g/L，酵母抽提物10g/L，甲醇8mL/L，YNB13.4g/L，100mM/L?pH6.0的磷酸緩沖液。?

10.權利要求1所述葡萄糖氧化酶突變體的應用。?