[發明專利]一種非法添加壯陽類化學成分的液-質多指標快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310697720.3
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103926336A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 陳曉虎;秦劍;鄒江;王白露;任學毅;曾令高;蘇晶;況剛;梁靜
• 申請（專利權）人: 重慶市食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 重慶輝騰律師事務所 50215
• 代理人: 武小赟

技術領域

本發明涉及一種保健食品和藥品中非法添加成分的快速檢測方法，更具體的說涉及一種非法添加壯陽類化學成分的液-質多指標快速檢測方法。

技術背景

液相色譜-質譜聯用技術(HPLC-MS)即液質聯用技術。這種技術的分離系統是液相色譜，而檢測系統則為質譜，即利用色譜的分離技術，將混合樣品分離成單一的物質，按順序進入質譜后，這些物質被質譜的質量分析器打成碎片，由質譜檢測器來分析物質的結構，利用判斷鍵的斷裂方式，通過質核比照相應的對照圖庫，判斷離子碎片的結構，從而對未知樣品進行定性定量。這種液質聯用技術體現出了色譜與質譜的優勢互補，把色譜和質譜的優點結合起來，讓人們在分析中能夠利用它們的高分離力、高靈敏度和高選擇性等特點，再加上系統能夠提供對照譜圖，使得分析試驗能夠越來越簡便圓。液質聯用為比較成熟的技術，在當今許多領域如農藥殘留分析、食品分析、環境分析與藥物分析等方面得到了廣泛的應用。目前分析上常用的液質聯用系統基本從質譜方向分為質量分析器分類及離子源分類兩大類。質量分析器分類包括四級桿、飛行時間(TOF)、傅立葉變換質譜：離子源分類包括大氣壓化學電離源(APCI)、大氣壓光電離源(APPI)、電噴霧離子源(ESI)、基質輔助激光解吸電離源(MALDI)。

與傳統液相色譜的檢測器，如UV或者PAD比較，質譜具有靈敏度高和鑒定功能強等特點，加上液相色譜的分析范圍較廣，近年來液質聯用技術已經成為大型比賽中藥物分析方面最強有力的工具之一。尤其是近幾年對于各種藥物尤其是違禁藥物及其代謝產物的研究，國內外都有大量的文獻報道。

發明內容

但是由于針對某一種藥品或保健品可添加的同類化學成分非常多，如針對每一種成分逐一進行檢測，不僅檢測成本巨大，同時需要大量的檢測時間，不利于提高工作效率；所以本發明提供了一種非法添加壯陽類化學成分的液-質多指標快速檢測方法。具體的操作步驟為：

1）取相當于一次口服劑量的中成藥或保健食品（固體制劑需研細，液體制劑直接取樣），加甲醇25ml，超聲處理10分鐘，用微孔濾膜（﹥0.45μm）濾過，濾液用甲醇適當稀釋，作為供試品溶液。

2）取西地那非、豪莫西地那非、羥基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、紅地那非、那紅地那非、伐地那非、偽伐地那非、他達拉非、氨基他達拉非對照品適量，分別加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。

3）上機檢測：通過高效液相色譜-飛行時間質譜聯用方法對樣品進行篩查和鑒定。

高效液相色譜儀：waters?AQUITY?UPLC儀

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（色譜柱為WATERS?BEH?C18，100mm×2.1mm，1.7μm）

以甲醇-乙腈（4:3）為流動相A,以含0.1%甲酸的10mmol/L的甲酸銨溶液為流動相B，按表1所述的流動相比例進行梯度洗脫；

表1流動相比例

檢測波長為230nm；

流速：0.3ml/min；

柱溫：40℃；

樣品溫度：15℃；

進樣量：1ul；

飛行時間質譜儀：waters?Q-TOF儀；

電噴霧電離子源（ESI）；

質譜檢測參數：ESI⁺掃描；

干燥氣溫度：350℃；

錐孔電壓：35v；

掃描方式：一級質譜全掃描、二級質譜全掃描，掃描范圍：100～1000m/z。

4）鑒定：

供試品色譜中，出現與混合對照品中各對照品色譜保留時間相同的色譜峰，并且供試品該色譜峰液質聯用的一級質譜及二級質譜均與對照品一致，即判斷此供試品為陽性。

供試品色譜中，未出現與混合對照品中各對照品色譜保留時間相同的色譜峰，即判斷此供試品為陰性。

本發明的有益技術效果是：本發明建立了一種非法添加的壯陽類化學成分，的高效檢測方法，與單一指標檢測項目，檢測限和專屬性均無顯著差異；且具有很高的檢測效率。

附圖說明

圖1對照品提取離子流色譜圖；

圖2陰性樣品及混合對照品總離子流圖；

圖3對照品一級質譜圖；

圖4對照品二級質譜圖；

圖5陽性樣品總離子流圖；

圖6陽性樣品提取離子流圖（475.213,0.05Da）；

圖7陽性樣品一級質譜圖；

圖8陽性樣品二級質譜圖；