[發(fā)明專利]一種檢測(cè)17β-雌二醇的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310696497.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103675062A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃加棟;李杰;劉素
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/30
• 分類號(hào): G01N27/30;G01N33/53
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.本文發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟：

1、檢測(cè)17β-雌二醇的電化學(xué)免疫傳感器的制備步驟如下：

(1)石墨烯-聚苯胺的制備：

25?mg的GO溶于50?ml?1?mol/L?H₂SO₄中，超聲1?h，形成分散均勻的溶液；加入200?μL的苯胺單體再超聲30?min；加入0.06?g的(NH4)₂S₄O₈，20?℃超聲2?h；得到的復(fù)合物通過(guò)過(guò)濾收集，60℃干燥；

(2)?抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記層的制備：

?2?ml?1%的H₂PtCl₆·6H₂O加入到8?ml?水中，80℃攪拌狀態(tài)下加入1%的硼氫化鈉溶液，攪拌4?h，得到PtNPs；5.0?mg的多巴胺加入到5.0?ml?PtNPs溶液中，用Tris–HCl將pH?調(diào)節(jié)至8.5，室溫下攪拌5?h；離心用水清洗三次，得到多巴胺功能化的PtNPs；在將其加入到含有20?mg檸檬酸鈉的HAuCl₄溶液中，室溫下攪拌兩個(gè)小時(shí)；離心清洗得到PDA-PtNPs-AuNPs納米材料，溶于5?ml水中備用；100?μL，1mg/mL的辣根過(guò)氧化物酶?(HRP)?和100?μL，5?μg/mL的雌二醇抗體?(Ab)加入到2?ml的上述材料中，4℃下攪拌一夜；用PBS緩沖溶液清洗三次，得到納米復(fù)合物標(biāo)記層PDA-PtNPs-AuNP-HRP-Ab；

(3)?檢測(cè)17β-雌二醇的電化學(xué)免疫傳感器的制備步驟如下：

5?mg?GO-PANI超聲1h溶于5?mL?DMF中，滴加20?μL的GO-PANI溶液在玻碳電極表面，室溫下晾干；將修飾的電極浸在含有1?mM?HAuCl₄?and?1?mM?H₂PtCl₆的0.2?M的Na₂SO₄溶液中，通過(guò)恒電位方法進(jìn)行掃描還原，掃描電位為-0.2?V，掃描時(shí)間是300?s；這樣在GO-PANI表面修飾了一成Au-PtNPs的納米合金；滴加10?μl，10?μg/mL的17β-雌二醇完全抗原在修飾好的電極表面，室溫下干燥5?h；用10?μl?BSA?(1%)封閉的基本面殘余的活性位點(diǎn)；每一步修飾后用PBS緩沖溶液曲線電極；得到制備的免疫傳感器電極，4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.如權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)17β-雌二醇的電化學(xué)免疫傳感器，用于檢測(cè)17β-雌二醇的步驟如下：

(1)?滴加10?μl抗體標(biāo)記層和10?μl游離的17β-雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品在制備的電極表面，室溫下培養(yǎng)30?min，用PBS緩沖溶液沖洗未結(jié)合的抗體和標(biāo)準(zhǔn)品；

(2)?以Ag/AgCl電極為參比電極，鉑絲電極為對(duì)比電極，制備的電極為工作電極，在含有8?mmol/L?H₂O₂的PBS溶液中進(jìn)行循環(huán)法掃描，掃描電壓是-0.4?V至0.6?V，掃描速率是50?mV/s；根據(jù)添加H₂O₂前后的的信號(hào)變化和17β-雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品濃度之間的關(guān)系，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(3)?將待測(cè)樣品代替17β-雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行檢測(cè)。