[發(fā)明專利]具有體內(nèi)示蹤和腫瘤治療作用的間充質(zhì)干細(xì)胞及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310695256.4
• 申請(qǐng)日: 2013-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN103695373B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宗金;韓忠朝;冷良;韓之波;徐旸;趙錢杰;王悅冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南開大學(xué);北京漢氏聯(lián)合生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867;A61P35/00
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11447
• 代理人: 耿超,王浩然

1.一種轉(zhuǎn)基因細(xì)胞在制備具有乳腺癌治療作用并且能夠進(jìn)行體內(nèi)示蹤的藥物中的用途，該轉(zhuǎn)基因細(xì)胞通過(guò)具體步驟如下的制備方法制備得到：

第1、將亞克隆的含海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的片段插入到商業(yè)化載體pLV-EF1α-MCS-IRES-Bsd的多克隆位點(diǎn)當(dāng)中，得到pLV-EF1α-TF-Bsd質(zhì)粒；

第2、用293T細(xì)胞鋪六孔板，密度為1.5×10⁶細(xì)胞/孔，用于轉(zhuǎn)染；

第3、用Lipo-2000將第1步中構(gòu)建的pLV-EF1α-TF-Bsd慢病毒表達(dá)質(zhì)粒和慢病毒包裝質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入第2步的293T細(xì)胞；

第4、第3步293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染16小時(shí)后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基，換液后24小時(shí)收集病毒上清，儲(chǔ)于-80℃冰箱備用；

第5、用人臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞鋪六孔板，密度為1×10⁵細(xì)胞/孔，用于病毒感染；

第6、待第4步中的病毒上清常溫化凍后，混合2毫升不含抗生素的全培養(yǎng)基和1毫升第4步中的病毒上清加入間充質(zhì)干細(xì)胞孔內(nèi)，并加入Polybrene 24μg/孔，1600rpm，37℃離心1小時(shí)；

第7、離心結(jié)束后換新鮮全培養(yǎng)基2毫升/孔，繼續(xù)置于37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)；

第8、48小時(shí)后向經(jīng)病毒感染后的間充質(zhì)干細(xì)胞加入Bsd進(jìn)行藥篩共計(jì)3天，以得到穩(wěn)定表達(dá)海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人臍帶來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，即轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。