[發明專利]具有體內示蹤和腫瘤治療作用的間充質干細胞及其制備方法有效
| 申請號： | 201310695256.4 | 申請日： | 2013-12-13 |
| 公開（公告）號： | CN103695373B | 公開（公告）日： | 2018-01-19 |
| 發明（設計）人： | 李宗金;韓忠朝;冷良;韓之波;徐旸;趙錢杰;王悅冰 | 申請（專利權）人： | 南開大學;北京漢氏聯合生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙)11447 | 代理人： | 耿超,王浩然 |
| 地址： | 300071*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 具有 體內 腫瘤 治療 作用 轉基因 細胞 及其 制備 方法 | ||
1.一種轉基因細胞在制備具有乳腺癌治療作用并且能夠進行體內示蹤的藥物中的用途，該轉基因細胞通過具體步驟如下的制備方法制備得到：
第1、將亞克隆的含海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的片段插入到商業化載體pLV-EF1α-MCS-IRES-Bsd的多克隆位點當中，得到pLV-EF1α-TF-Bsd質粒；
第2、用293T細胞鋪六孔板，密度為1.5×106細胞/孔，用于轉染；
第3、用Lipo-2000將第1步中構建的pLV-EF1α-TF-Bsd慢病毒表達質粒和慢病毒包裝質粒轉染入第2步的293T細胞；
第4、第3步293T細胞轉染16小時后更換新鮮DMEM培養基，換液后24小時收集病毒上清，儲于-80℃冰箱備用；
第5、用人臍帶來源的間充質干細胞鋪六孔板，密度為1×105細胞/孔，用于病毒感染；
第6、待第4步中的病毒上清常溫化凍后，混合2毫升不含抗生素的全培養基和1毫升第4步中的病毒上清加入間充質干細胞孔內，并加入Polybrene 24μg/孔，1600rpm，37℃離心1小時；
第7、離心結束后換新鮮全培養基2毫升/孔，繼續置于37℃培養箱進行培養；
第8、48小時后向經病毒感染后的間充質干細胞加入Bsd進行藥篩共計3天，以得到穩定表達海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人臍帶來源的間充質干細胞，即轉基因細胞。
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