[發明專利]一種測定噁喹酸含量的液相色譜分析方法

有效

• 申請號: 201310694962.7
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103645261A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 彭要武;田文敬;徐建義
• 申請（專利權）人: 湖北美天生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫藥化工質量檢測技術領域，特別涉及一種測定噁喹酸含量的液相色譜分析方法。

背景技術

噁喹酸又稱氧環噁喹酸、奧基索林酸、奧林酸（Oxilinic?acid），英文縮寫OA，喹諾酮類的第二代產品，為白色帶黃白色柱狀結晶或結晶性粉末，無臭無味，熔點320℃，幾乎不溶于水和乙醇，能溶于蟻酸和氫氧化鈉溶液，不吸潮，對熱、濕、光比較穩定。它具有較強的廣譜性，對革蘭氏陰性菌和一部分陽性菌有較強的抗菌效力，并與抗生素無交叉耐藥性，但對真菌與結核桿菌沒有抗菌作用，具有用量低，抑菌效果好等優點，國外水產養殖者認為它是治療水產動物疾病較為理想的藥物之一，對鰻弧菌、嗜水氣單胞桿菌等魚類病原菌有相當強的抗菌活性。

目前實施的進口獸藥質量標準和歐洲藥典中，噁喹酸的含量測定均采用非水滴定法進行測定，由于化學合成法制備的噁喹酸中含有少量的酸性雜質，會干擾酸堿指示劑的顯色，并且酸性雜質的存在，會導致測定結果比實際偏高。

另外，在現有文獻中雖然公開了一些采用液相色譜法測噁喹酸含量的方法，但是其測量范圍小，適用于低含量噁喹酸的測量，并不適于測量化學合成法制備的噁喹酸產品含量且測量結果不理想。如現有文獻公開了一種水產品中噁喹酸殘留量的檢測技術研究；具體地，采用液相色譜法進行測量，高效液相色譜條件為色譜柱采用反相C18柱，熒光檢測器激發波長為325nm，發射波長為369nm，流動相為0.02mol/L磷酸+乙腈+四氫呋喃(體積比為69∶16∶15)，流速為0.8ml/min。噁喹酸標準曲線線性范圍在10～200ng/mL。不同濃度水平下，噁喹酸的回收率為79%～93%，變異系數小于10%，檢測限為10μg/kg。

發明內容

本發明的目的在于彌補上述現有技術之不足，提供了一種測定噁喹酸含量的液相色譜（HPLC）分析方法，采用該方法能夠使噁喹酸與雜質A、B、C有效分離，準確測定噁喹酸產品的含量。所述技術方案如下：本發明實施例提供了一種測定噁喹酸含量的液相色譜分析方法，該方法包括以下步驟：（1）待測樣品溶液的制備：將待測噁喹酸樣品于75-85℃（水浴加熱）溶于二甲基甲酰胺與甲醇按體積比2:3～5的混合溶劑中，配制成濃度為0.1～0.5mg/mL的溶液，用0.22μm～0.45μm的微孔濾膜過濾得到樣品溶液。

（2）樣品檢測：采用外標法測定步驟（1）得到的樣品溶液中噁喹酸的含量，其色譜條件為：色譜柱為C18柱，流動相：乙腈、添加有機堿(有機堿占流動相總體積的百分比為0.02-0.05%)的有機改性劑和添加有機酸(有機酸占流動相總體積的百分比為0.2-0.5%)的水按體積比為10～30：5～20:60～90組成的混合溶液，流速：0.3～1.2mL/min，檢測波長：300～350nm，柱溫：35～45℃，進樣量：5～20μL。其中，有機堿包括三正己胺、三正庚胺或三正辛胺等，有機改性劑包括甲醇或四氫呋喃等，有機酸包括乙酸、三氟乙酸或檸檬酸等。

優選地，在前述步驟（1）中，二甲基甲酰胺與甲醇的體積比為2:3。

優選地，在前述步驟（1）中，樣品溶解溫度為80℃。

其中，在前述步驟（2）中，C18柱為固定相為十八烷基鍵合硅膠的色譜柱，柱長150～250mm×內徑4.6mm×填料粒徑3～10μm。

優選地，在前述步驟（2）中，有機改性劑為四氫呋喃。

優選地，在前述步驟（2）中，有機堿為三正辛胺。

優選地，在前述步驟（2）中，有機酸為檸檬酸。

優選地，在前述步驟（2）中，乙腈、添加有機堿的有機改性劑和添加有機酸的水的體積比為20:10:70。

其中，在前述步驟（2）中，有機堿占流動相總體積的百分比為0.03%。

其中，在前述步驟（2）中，有機酸占流動相總體積的百分比為0.3%。

優選地，在前述步驟（2）中，流動相的流速為0.5mL/min，檢測波長為330nm，柱溫為40℃。

具體地，本發明實施例提供的測定噁喹酸含量的液相色譜分析方法，包括：（1）待測樣品溶液和對照品溶液的制備：取適量噁喹酸樣品，在二甲基甲酰胺與甲醇按體積比2:3～5的混合溶劑中于80℃水浴中溶解后，配制成濃度為0.1～0.5mg/mL的溶液，用0.22μm～0.45μm的微孔濾膜過濾；取噁喹酸對照品適量，同法配制，供色譜分析用。