[發明專利]一種增強2-酮基-L-古龍酸發酵菌種活力的方法

無效

• 申請號: 201310692592.3
• 申請日: 2013-12-18
• 公開（公告）號: CN103710398A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 陳紅;胡少斌;常芳
• 申請（專利權）人: 江蘇江山制藥有限公司
• 主分類號: C12P7/60
• 分類號: C12P7/60
• 代理公司: 靖江市靖泰專利事務所 32219
• 代理人: 陸平

技術領域

本發明屬于微生物發酵技術領域，更具體地說，涉及一種增強2-酮基-L-古龍酸發酵菌種活力的方法。

背景技術

維生素C（VC）是一種水溶性維生素，又名?L-?抗壞血酸，能參與體內多種羥化反應

和氧化還原反應，是一類重要的細胞代謝氧化還原化合物，在生物體中起著必不可少的生理作用。維生素C用于預防壞血病，各種急、慢性傳染病及紫癜等的輔助治療，維生素C也廣泛用于食品、飼料、化妝品中。20世紀70年代初，尹光琳等篩選出了可以直接將L-山梨糖轉化為合成維生素C的重要前體?2-酮基-L-古龍酸（2-KLG）的混合菌種—巨大芽孢桿菌（Bacillus?megaterium）和普通生酮古龍酸菌（Ketogulonigenium?sp.），發明了維生素C二步發酵法。該方法通過兩步發酵大大簡化了萊氏法生產維生素?C?的合成路線，具有糖酸轉化率高的突出優勢，目前國內生產廠家生產維生素?C?都采用二步發酵法。第二步混菌發酵的發酵水平決定了二步發酵法的發酵水平。在目前維生素C的生產企業中，發酵的工藝路線和反應器的改造研究沒有大的突破。在發酵生產2-酮基-L-古龍酸的過程中，改進發酵生產工藝，增強菌種活力，縮短發酵周期，提高發酵技術是必需的。目前通過氮、碳分消增強2-酮基-L-古龍酸發酵菌種活力還沒有相關文獻報道。

發明內容

針對現有技術中存在的上述問題，本發明提供一種增強2-酮基-L-古龍酸發酵菌種活力的方法。

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種增強2-酮基-L-古龍酸發酵菌種活力的方法，將2-酮基-L-古龍酸種子罐培養基中的氮源和碳源進行分開消毒，待冷卻至28℃-30℃時混合。

進一步的，所述氮源包括玉米漿、酵母膏和尿素。

更進一步的，所述碳源為L-山梨糖。

種子罐培養基配方（重量百分比）：山梨糖1.7%，玉米漿0.5%，酵母膏0.3%，尿素0.2%，硫酸鎂0.02%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.5%，PH6.7-7.2。

種子罐培養條件：培養溫度28-30℃，培養過程控制溶解氧30-50%，接種量10%。

種子罐培養基消毒方式：種子罐培養基主要碳源L-山梨糖與其它原料分消，待冷卻至30℃左右混合。

種子罐培養至對數期，種液中2-酮基-L-古龍酸的測定為碘量法；種液中菌密度測定為顯微計數法，采用血球計數板進行計數。

發酵罐培養基配方：山梨糖8.0%，玉米漿0.5%，尿素0.1%，硫酸鎂0.01%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.3%，其中山梨糖在培養過程中以液體形式流加。培養溫度29-31℃，培養過程控制溶解氧30-50%，用25%的碳酸鈉溶液控制PH6.7-7.2。

有益效果：采用本發明的工藝，氮、碳分消減少有害物質產生，培養基營養成分破壞少，利于生產菌生產繁殖，能有效增強菌種活力，縮短2-酮基-L-古龍酸發酵周期。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進一步進行描述。

1、種子罐培養基配方：山梨糖1.7%，玉米漿0.5%，酵母膏0.3%，尿素0.2%，硫酸鎂0.02%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.5%，PH6.7-7.2。

2、種子罐培養條件：培養溫度28-30℃，培養過程控制溶解氧30-50%，接種量10%。

3、種子罐培養基消毒方式：種子罐培養基主要碳源L-山梨糖與其它原料分消，待冷卻至30℃左右混合。

4、種子罐培養至對數期，種液中2-酮基-L-古龍酸的測定：改進的碘量法；種液中菌密度測定：顯微計數法，采用血球計數板進行計數。

5、發酵罐培養基配方：山梨糖8.0%，玉米漿0.5%，尿素0.1%，硫酸鎂0.01%，磷酸二氫鉀0.1%，碳酸鈣0.3%，其中山梨糖在培養過程中以液體形式流加。培養溫度29-31℃，培養過程控制溶解氧30-50%，用25%的碳酸鈉溶液控制PH6.7-7.2。

6、實施舉例：