[發明專利]一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物及其制備方法

有效

• 申請號: 201310692429.7
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN103656607A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 郭智華
• 申請（專利權）人: 弘美制藥（中國）有限公司
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K35/30;A61P9/10;A61P25/00
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 另婧

技術領域

本發明涉及一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物及其制備方法，具體地說，涉及一種由從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的含有多肽以及包括游離氨基酸和游離谷氨酸在內的多種氨基酸的腦蛋白水解物，以及該腦蛋白水解物的制備方法，屬于生物制劑領域。

背景技術

腦組織含有豐富的蛋白質，長期以來人們一直研究把動物腦組織中的蛋白質水解成氨基酸和低分子肽，用來治療腦血管代償不足所致的功能失調、中風、腦記憶障礙和腦外傷引起的功能紊亂、腦震蕩后遺癥等疾病。

腦蛋白水解物就是一種由動物腦組織經蛋白酶水解后得到的富含多種氨基酸和小分子多肽的混合物，由于含有大量人腦必須的氨基酸和多種神經生長的活性肽，可以調節和改進神經元的代謝，臨床上，腦蛋白水解物主要用于治療顱腦損傷和腦血管病（如腦梗和腦出血等）后遺癥的恢復治療，加速腦部神經系統的功能恢復。

其中以奧地利Ebewe制藥廠研究的腦活素臨床應用得較廣泛。早于20世紀90年代初，國內學者便對其工藝、質量、藥理藥效及臨床應用進行了研究，發表了大量的文章。

如申請號為94104516.1的中國專利申請公開了一種腦蛋白水解物的制備方法，采用勻漿、脫脂、風干、酶解、超濾、離子交換等步驟，該方法中風干步驟會造成多肽等物質的流失；申請號為01130523.1、200510064567.6、200710055421.4等中國專利申請公開了腦蛋白水解物的新的制備方法，上述方法中都存在使得氨基酸大量流失的步驟，因此，上述方法制得商榷；申請號為200610065169.0在制備腦蛋白水解物的過程中，加入了外源氨基酸，這也是目前臨床應用的腦蛋白水解物藥物的基本情況，說明現有方法需要進一步改進；申請號為200410022091.5的中國專利公開了一種腦蛋白水解物制劑的制備方法，該方法是直接將腦組織勻漿液進行蛋白酶水解，并通過進一步加工得到腦蛋白水解物，這種工藝的缺點就是，在腦組織勻漿液中含有大量脂肪，影響蛋白酶的水解效果，制備效率低，同時，較多的脂肪類物質會混在最后的腦蛋白水解物中，影響最終藥品的外觀和穩定性。

發明內容

針對現有技術的缺陷，本發明提供一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物。本發明所提供的腦蛋白水解物中不僅大分子物質含量低，游離脂肪酸含量低，且游離氨基酸含量高，生物活性高。

同時，本發明還提供所述的腦蛋白水解物的制備方法，其制備方法操作簡單，適用于工業化大生產，并且產率高，可使企業獲得較高的經濟效益。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物，其中，所述的腦蛋白水解物是采用如下方法制備得到的：

1）取除人以外的哺乳動物的腦組織，自然緩化至無冰渣，剔除雜質，得到干凈的腦組織；

2）取干凈的腦組織進行勻漿，每次勻漿2～3分鐘，得到腦組織勻漿液；

3）向腦組織勻漿液中加入2.5～3.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，得丙酮渣；再向丙酮渣中加入1.5～2.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，濾渣在60～70℃下干燥3～5小時，得到腦蛋白粉；

4）取胰蛋白酶、無水氯化鈣用冷純化水溶解，配制成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胰蛋白酶溶液，室溫下放置1～2小時活化；胃蛋白酶用冷純化水溶解，配制成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胃蛋白酶溶液；

5）取腦蛋白粉，加入純化水，攪拌均勻，加熱至40～45℃，加入活化好的胰蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解3.5～4.5小時后，再加入胃蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解1.5～2.5小時，酶解結束，加熱至85～95℃、保溫25～35分鐘，然后降溫至20～30℃，得到酶解液；

6）將所得的酶解液用離心機離心15～25分鐘，收集上清液，過濾得到澄清液體，控制澄清液體的pH值至5.0～7.0；

7）將所得澄清液體進行濃縮、干燥、粉碎過篩，得到腦蛋白水解物干粉。

作為本發明所述的腦蛋白水解物的第一種優選方案，步驟4）中所述的無水氯化鈣用量為胰蛋白酶用量的12～13wt%。

作為本發明所述的腦蛋白水解物的第二種優選方案，步驟5）中加入的活化好的胰蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的2～3wt%；加入的胃蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的0.5～1wt%。