[發明專利]一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物及其制備方法

有效

• 申請號: 201310692429.7
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN103656607A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 郭智華
• 申請（專利權）人: 弘美制藥（中國）有限公司
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61K35/30;A61P9/10;A61P25/00
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 另婧

1.一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物，其特征在于，所述的腦蛋白水解物是采用如下方法制備得到的：

1）取除人以外的哺乳動物的腦組織，自然緩化至無冰渣，剔除雜質，得到干凈的腦組織；

2）取干凈的腦組織進行勻漿，每次勻漿2～3分鐘，得到腦組織勻漿液；

3）向腦組織勻漿液中加入2.5～3.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，得丙酮渣；再向丙酮渣中加入1.5～2.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，濾渣在60～70℃下干燥3～5小時，得到腦蛋白粉；

4）取胰蛋白酶、無水氯化鈣用冷純化水溶解，配制成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胰蛋白酶溶液，室溫下放置1～2小時活化；胃蛋白酶用冷純化水溶解，配制成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胃蛋白酶溶液；

5）取腦蛋白粉，加入純化水，攪拌均勻，加熱至40～45℃，加入活化好的胰蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解3.5～4.5小時后，再加入胃蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解1.5～2.5小時，酶解結束，加熱至85～95℃、保溫25～35分鐘，然后降溫至20～30℃，得到酶解液；

6）將所得的酶解液用離心機離心15～25分鐘，收集上清液，過濾得到澄清液體，控制澄清液體的pH值至5.0～7.0；

7）將所得澄清液體進行濃縮、干燥、粉碎過篩，得到腦蛋白水解物干粉。

2.根據權利要求1所述的腦蛋白水解物，其特征在于，步驟4）中所述的無水氯化鈣的用量為胰蛋白酶用量的12～13wt%。

3.根據權利要求1所述的腦蛋白水解物，其特征在于，步驟5）中加入的活化好的胰蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的2～3wt%；加入的胃蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的0.5～1wt%。

4.根據權利要求1～3任意一項所述的腦蛋白水解物，其特征在于，步驟5）中所述的胃蛋白酶在加入前先進行超聲波預處理。

5.根據權利要求4所述的腦蛋白水解物，其特征在于，所述的超聲波預處理為以超聲功率為60～80W、超聲頻率為30～35kHz、超聲時間與間歇時間比為1:1的超聲波進行超聲波預處理8～12min。

6.一種權利要求1所述的吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：

1）取除人以外的哺乳動物的腦組織，自然緩化至無冰渣，剔除雜質，得到干凈的腦組織；

2）取干凈的腦組織進行勻漿，每次勻漿2～3分鐘，得到腦組織勻漿液；

3）向腦組織勻漿液中加入2.5～3.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，得丙酮渣；再向丙酮渣中加入1.5～2.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，濾渣在60～70℃下干燥3～5小時，得到腦蛋白粉；

4）取胰蛋白酶、無水氯化鈣用冷純化水溶解，配成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胰蛋白酶溶液，室溫下放置1～2小時活化；胃蛋白酶用冷純化水溶解，配成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胃蛋白酶溶液；

5）取腦蛋白粉，加入純化水，攪拌均勻，加熱至40～45℃，加入活化好的胰蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解3.5～4.5小時后，再加入胃蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解1.5～2.5小時，酶解結束，加熱至85～95℃、保溫25～35分鐘，然后降溫至20～30℃，得到酶解液；

6）將所得的酶解液用離心機離心15～25分鐘，收集上清液，過濾得到澄清液體，控制澄清液體的pH值至5.0～7.0；

7）將所得澄清液體進行濃縮、干燥、粉碎過篩，得到腦蛋白水解物干粉。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟4）中所述的無水氯化鈣的用量為胰蛋白酶用量的12～13wt%。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟5）中加入活化好的胰蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的2～3wt%；加入胃蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的0.5～1wt%。