[發(fā)明專利]一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310692429.7 | 申請日： | 2013-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN103656607A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭智華 | 申請（專利權(quán)）人： | 弘美制藥（中國）有限公司 |
| 主分類號： | A61K38/01 | 分類號： | A61K38/01;A61K35/30;A61P9/10;A61P25/00 |
| 代理公司： | 北京元中知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11223 | 代理人： | 另婧 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 吡拉西坦腦 蛋白 水解 中的 及其 制備 方法 | ||
1.一種吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物，其特征在于，所述的腦蛋白水解物是采用如下方法制備得到的：
1）取除人以外的哺乳動物的腦組織，自然緩化至無冰渣，剔除雜質(zhì)，得到干凈的腦組織；
2）取干凈的腦組織進(jìn)行勻漿，每次勻漿2～3分鐘，得到腦組織勻漿液；
3）向腦組織勻漿液中加入2.5～3.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，得丙酮渣；再向丙酮渣中加入1.5～2.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，濾渣在60～70℃下干燥3～5小時，得到腦蛋白粉；
4）取胰蛋白酶、無水氯化鈣用冷純化水溶解，配制成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胰蛋白酶溶液，室溫下放置1～2小時活化；胃蛋白酶用冷純化水溶解，配制成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胃蛋白酶溶液；
5）取腦蛋白粉，加入純化水，攪拌均勻，加熱至40～45℃，加入活化好的胰蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解3.5～4.5小時后，再加入胃蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解1.5～2.5小時，酶解結(jié)束，加熱至85～95℃、保溫25～35分鐘，然后降溫至20～30℃，得到酶解液；
6）將所得的酶解液用離心機(jī)離心15～25分鐘，收集上清液，過濾得到澄清液體，控制澄清液體的pH值至5.0～7.0；
7）將所得澄清液體進(jìn)行濃縮、干燥、粉碎過篩，得到腦蛋白水解物干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物，其特征在于，步驟4）中所述的無水氯化鈣的用量為胰蛋白酶用量的12～13wt%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦蛋白水解物，其特征在于，步驟5）中加入的活化好的胰蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的2～3wt%；加入的胃蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的0.5～1wt%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項所述的腦蛋白水解物，其特征在于，步驟5）中所述的胃蛋白酶在加入前先進(jìn)行超聲波預(yù)處理。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的腦蛋白水解物，其特征在于，所述的超聲波預(yù)處理為以超聲功率為60～80W、超聲頻率為30～35kHz、超聲時間與間歇時間比為1:1的超聲波進(jìn)行超聲波預(yù)處理8～12min。
6.一種權(quán)利要求1所述的吡拉西坦腦蛋白水解物片中的腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：
1）取除人以外的哺乳動物的腦組織，自然緩化至無冰渣，剔除雜質(zhì)，得到干凈的腦組織；
2）取干凈的腦組織進(jìn)行勻漿，每次勻漿2～3分鐘，得到腦組織勻漿液；
3）向腦組織勻漿液中加入2.5～3.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，得丙酮渣；再向丙酮渣中加入1.5～2.5倍體積的丙酮，攪拌25～35分鐘，靜置3.5～4.5小時，過濾，濾渣在60～70℃下干燥3～5小時，得到腦蛋白粉；
4）取胰蛋白酶、無水氯化鈣用冷純化水溶解，配成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胰蛋白酶溶液，室溫下放置1～2小時活化；胃蛋白酶用冷純化水溶解，配成濃度為0.02%～0.04%g/ml的胃蛋白酶溶液；
5）取腦蛋白粉，加入純化水，攪拌均勻，加熱至40～45℃，加入活化好的胰蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解3.5～4.5小時后，再加入胃蛋白酶，攪拌均勻，控制溫度在40～45℃之間酶解1.5～2.5小時，酶解結(jié)束，加熱至85～95℃、保溫25～35分鐘，然后降溫至20～30℃，得到酶解液；
6）將所得的酶解液用離心機(jī)離心15～25分鐘，收集上清液，過濾得到澄清液體，控制澄清液體的pH值至5.0～7.0；
7）將所得澄清液體進(jìn)行濃縮、干燥、粉碎過篩，得到腦蛋白水解物干粉。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟4）中所述的無水氯化鈣的用量為胰蛋白酶用量的12～13wt%。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟5）中加入活化好的胰蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的2～3wt%；加入胃蛋白酶的量為步驟2）的干凈的腦組織總重量的0.5～1wt%。
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