[發明專利]NK細胞體外培養方法有效
| 申請號： | 201310691566.9 | 申請日： | 2013-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN103627672A | 公開（公告）日： | 2014-03-12 |
| 發明（設計）人： | 任秀寶;于津浦 | 申請（專利權）人： | 天津醫科大學附屬腫瘤醫院 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 天津市宗欣專利商標代理有限公司 12103 | 代理人： | 董光仁 |
| 地址： | 300060 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | nk 細胞 體外 培養 方法 | ||
1.一種NK細胞體外培養方法，該方法是按照以下步驟進行的：
a.用PBS稀釋Herceptin至濃度0.85-1.05mg/ml，取910μl；用PBS稀釋人免疫球蛋白至濃度1-2mg/ml，取400μl，合并后再用PBS補齊至20ml，均勻鋪滿培養瓶瓶底，密封置于4℃冰箱中過夜，次日取出，將液體倒出，用PBS洗2遍；
b.取外周富集血4-10ml，用Ficoll法進行密度梯度離心,?離心速度為350×g，離心時間為15-20分鐘，吸取中間界面層的單個核細胞，用PBS洗滌3次，加入無血清培養基，調整細胞濃度為1.0×106/ml-3.0×106/ml；然后加入細胞因子IL-2至終濃度10ng/ml，IL-15至終濃度50ng/ml，加入到已經用Herceptin包被的培養瓶中，37℃，5%?CO2孵箱中連續培養15天，每3天補加含20ng/ml的IL-2和100ng/ml的IL-15的無血清培養基一次，補液量與補液前液體量相同，即補液后體積為補液前的2倍。
2.根據權利要求1所述NK細胞體外大規模培養方法，其特征在于:?PBS稀釋的Herceptin至濃度0.95mg/ml。
3.根據權利要求1所述NK細胞體外大規模培養方法，其特征在于:PBS稀釋5%的人免疫球蛋白至濃度1mg/ml。
4.根據權利要求1所述NK細胞體外大規模培養方法，其特征在于:吸取中間界面層的單個核細胞，用PBS洗滌3次，加入無血清培養基，調整細胞濃度為2.0×106/ml。
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