[發(fā)明專(zhuān)利]一種氧連接氮乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）修飾糖蛋白質(zhì)及糖肽的化學(xué)衍生方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310691220.9
• 申請(qǐng)日: 2013-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104713754A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗華;夏思敏;楊開(kāi)廣;張玉奎
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N1/28
• 分類(lèi)號(hào): G01N1/28
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種氧連接氮乙酰葡糖胺修飾糖蛋白質(zhì)的衍生方法,其特征在于：該衍生方法是以高碘酸鈉作氧化劑，對(duì)修飾的氮乙酰葡糖胺基團(tuán)上的鄰位羥基進(jìn)行開(kāi)環(huán)反應(yīng)形成兩個(gè)醛基基團(tuán)，利用吉拉德試劑上的酰阱和新生成的醛基反應(yīng)，從而將糖蛋白質(zhì)化學(xué)衍生上季銨鹽基團(tuán)。

2.一種氧連接氮乙酰葡糖胺修飾糖肽的衍生方法,其特征在于：該衍生方法是以高碘酸鈉作氧化劑，對(duì)修飾的氮乙酰葡糖胺基團(tuán)上的鄰位羥基進(jìn)行開(kāi)環(huán)反應(yīng)形成兩個(gè)醛基基團(tuán)，利用吉拉德試劑上的酰阱和新生成的醛基反應(yīng)，從而將糖肽化學(xué)衍生上季銨鹽基團(tuán)。

3.按照權(quán)利要求1或2所述的衍生方法，其特征在于：與氧連接氮乙酰葡糖胺修飾糖蛋白質(zhì)及糖肽反應(yīng)的高碘酸鈉溶液濃度為20-30mM；反應(yīng)溫度35-40℃，反應(yīng)時(shí)間4-8小時(shí)，氧化反應(yīng)結(jié)束后，加入4-6倍于高碘酸鈉摩爾量亞硫酸鈉，反應(yīng)10-40分鐘，終止氧化反應(yīng)。整個(gè)過(guò)程在pH=5-6的30-100mM乙酸鈉溶液中進(jìn)行。

4.按照權(quán)利要求2所述的衍生方法，其特征在于：為避免糖肽N末端是絲氨酸或蘇氨酸殘基引發(fā)副反應(yīng)，采用甲醛二甲基化方法封閉N末端氨基，每100μg肽段加入1-4%甲醛溶液10-25μl，0.15-0.6mM氰基硼氫化鈉10-25μl，反應(yīng)0.5-2小時(shí)，反相除鹽去除甲醛和氰基硼氫化鈉。

5.按照權(quán)利要求1所述的衍生方法，其特征在于：將經(jīng)過(guò)高碘酸鈉氧化的糖蛋白質(zhì)樣品與濃度為10-100mM的吉拉德試劑混合，反應(yīng)1-6小時(shí)，反應(yīng)過(guò)程在pH=5-6的50mM乙酸鈉溶液中進(jìn)行，采用反相液相色譜分離除去未反應(yīng)的吉拉德試劑。