[發(fā)明專利]一種提取海洋微藻油體的蛋白的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310691217.7
• 申請(qǐng)日: 2013-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN104710520A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛松;申培麗;曹旭鵬;吳霜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C07K14/405
• 分類號(hào): C07K14/405;C07K1/30
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種提取微藻油體的蛋白的方法，其特征在于：?

（1）利用高壓、超聲、研磨或高滲破碎藻細(xì)胞后，油體因其密度低與其它亞細(xì)胞器經(jīng)超速離心后分離，油體浮在所有水相梯度頂層，收集油層，洗滌，具體為分離緩沖液中加入0.6-1.0M蔗糖，保護(hù)胞內(nèi)細(xì)胞器，利用高弗式壓碎器15000-20000psi破碎微藻細(xì)胞，選擇蔗糖梯度、離心速率或離心力，油體直徑在0.5-5um之間，收集頂層油體，洗滌；?

（2）將油脂和蛋白分離，用氯仿：甲醇（V/V1:2）或2-4倍體積冷丙酮12-20h,-20℃處理油體，離心，收集油相和沉淀；0.1%SDS復(fù)溶沉淀蛋白，凍干，即可得到目的蛋白。?

2.按照權(quán)利1所述方法，其特征在于：利用研磨（Beadsshocker/Beadbeater）破碎微藻細(xì)胞，顯微鏡觀察藻細(xì)胞破碎情況，測(cè)破碎后上清蛋白濃度，計(jì)算破碎率。?

3.按照權(quán)利1和2所述方法，其特征在于：利用超聲破碎微藻細(xì)胞，功率在3-100w,超聲5s,間隔1-5s,超聲1-5min。?

4.按照權(quán)利1和2所述方法，其特征在于：利用高滲破碎微藻細(xì)胞，將耐鹽微藻從高鹽營(yíng)養(yǎng)液中轉(zhuǎn)移到無鹽緩沖液中，溫和破碎且不破碎其它亞細(xì)胞器，然后再利用密度梯度離心分離純化油體。?

5.按照權(quán)利1所述方法，其特征在于：分離緩沖液可以用0.15Mtricine-KOH緩沖液或25-50mM?HEPES-KOH緩沖液或10-20mM?MOPS或PBS或Tris-HCl緩沖液，pH在7.0-8.0之間；緩沖液中加入KCl、MgCl₂、EDTA、EGTA、DTT,高濃度蔗糖以及PMSF或Cocktail蛋白酶抑制劑。?

6.按照權(quán)利1所述方法，其特征在于：蔗糖梯度為1.0M、0.6M、0.4M、0.2M、0M或30%、20%、10%、5%、0；離心力在10,000g-150,000g；離心時(shí)間30min-2h?。

7.按照權(quán)利1所述方法，其特征在于：步驟（1）整個(gè)過程在4℃條件下進(jìn)行。?