[發明專利]一種微藻藻株人工選育方法

在審

• 申請號: 201310691127.8
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN104711249A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發明（設計）人: 薛松;艾江寧;曹旭鵬
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N15/01;C12R1/89
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種微藻藻株人工選育方法，，其特征在于：包括微藻藻株常壓室溫等離子體誘變和基于吸光度與特異性熒光染料熒光強度變化的藻株篩選流程，具體操作包括：

(1)利用常壓室溫等離子體對天然藻株進行誘變：使用室溫常壓等離子體儀對微藻培養液進行誘變；

(2)將誘變處理后的微藻涂布于固體培養基上，在選擇性壓力條件下或正常培養條件下進行培養，同時以未誘變處理的藻液作為對照，對于正常培養條件下，至藻落生長出后，分別對誘變和對照組進行藻落計數，以致死率=（1-誘變藻落數/對照藻落數）×100%大于或等于90%為成功誘變的指標，對生長出誘變藻落進行96孔板培養篩選；對于選擇壓力下，生長出的藻落即用于96孔板培養篩選；

(3)利用酶標儀或者分光光度計對孔板培養的微藻OD值進行測定，獲得藻細胞生長情況；

(4)利用染料對孔板中液體培養的微藻細胞進行染色，測定細胞內代謝物的積累情況；

(5)以生長速度變化或代謝物含量變化情況為指標，最終確定目標藻株。

2.按照權利要求1中所述微藻藻株人工選育方法，其特征在于：天然藻株包括綠藻、金藻、硅藻單細胞藻類或者螺旋藻。

3.按照權利要求1所述微藻藻株人工選育方法，其特征在于：待誘變微藻細胞濃度在100-1000萬細胞/毫升，誘變微藻藻液在10～200μL，電源輸出功率為50～200W，工作氣流量為1～20SLM，等離子體發射源與樣品之間距離為1～10mm，放電時間5秒～2分鐘。

4.按照權利要求1所述微藻藻株人工選育方法，其特征在于：正常培養條件為目標微藻常規培養條件；選擇壓力性條件為根據期望誘變藻株所具有的特點，在正常培養條件下，升高或降低溫度，增強或減弱光照，使用營養缺陷型培養基或含有重金屬離子、含鹵素有機化合物、烴類化合物或抗生素的培養基。

5.按照權利要求1所述微藻藻株人工選育方法，其特征在于：根據期望得到的誘變藻株性狀，以生長速度提高或降低、在選擇性壓力條件下能夠存活以及細胞內目標代謝物的含量高低為指標，確定最終的目標藻株。