[發明專利]鑒別馬皰疹病毒1/4型的Lamp檢測引物及方法

無效

• 申請號: 201310690472.X
• 申請日: 2013-12-17
• 公開（公告）號: CN103757131A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 曲娟娟;胡曉亮;于敏
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于分型檢測馬皰疹病毒1/4型的環介導等溫擴增反應(Lamp)引物組，其特征在于：所述的引物組由4對引物構成，分別包括2對外引物和2對內引物；其中，所述的EHV1檢測外引物為EHV1FIP和EHV1BIP，內引物為EHV1F3和EHV1B3；所述EHV4外引物為EHV4FIP和EHV4BIP內引物為EHV4F3和EHV4B3，其序列如下。

2.一種包含權利要求1所述的一組引物的EHV1/4分型環介導等溫擴增反應(Lamp)檢測方法，其特征在于，檢測的步驟包括：病毒DNA的提取方法、EHV1/4分型Lamp檢測方法和擴增產物的檢測。

3.根據權利要求2所述的病毒DNA的提取方法，檢測樣品經液氮處理后研碎，用DNA提取試劑盒提取?病毒DNA，具體提取方法根據DNA提取試劑盒的說明書進行。

4.根據權利要求2所述的EHV1/4分型Lamp檢測方法，其特征在于：所述的25mLPCR反應體系包括有：

FIP（4μM），BIP（4μM），F3（0.5μM），B3（0.5μM），dNTP（7.5μM），MgCl₂（125μM）,10×buffer（2.5μM），Bst（16U），模板（2μL），H₂O（9μL）；檢測EHV1的Lamp反應程序為：62℃，45min，80℃,?2min；檢測EHV4的Lamp反應程序為：60℃,1h，80℃,?2min。

5.根據權利要求2所述的擴增產物的檢測，取2mL擴增產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，如出現斑馬狀條帶判斷為陽性，沒有出現條帶則判斷為陰性。