[發明專利]用于基因組DNA永久保存的接頭及方法

在審

• 申請號: 201310689316.1
• 申請日: 2013-12-16
• 公開（公告）號: CN103849617A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 覃振東
• 申請（專利權）人: 復旦大學;江蘇基譜生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

1.用于基因組DNA永久保存的接頭，其特征在于，接頭序列兩端帶有硫代堿基修飾。

2.根據權利要求1所述接頭，其特征在于，所述接頭包括接頭1和接頭2，其中所述接頭1包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示的DNA分子，所述接頭2包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示的DNA分子。

3.一種基因組DNA永久保存的方法，其特征在于，按照構建DNA短片段文庫的方法，將用于基因組DNA永久保存的接頭與隨機打斷樣品基因組DNA片段連接后擴增保存。

4.根據權利要求3所述方法，其特征在于，所述方法具體為隨機打斷樣品基因組DNA為一定長度的片段，在每個片段上分別連接序列兩端帶有硫代堿基修飾的接頭，利用與接頭組匹配的引物在高保真酶體系中擴增后低溫保存。

5.根據權利要求4所述方法，其特征在于，所述在片段連接帶有硫代堿基修飾的接頭前還包括片段末端補平和加A的步驟。

6.根據權利要求4或5所述方法，其特征在于，所述打斷為物理打斷或限制性內切酶酶切。

7.根據權利要求4或5所述方法，其特征在于，所述打斷后的樣品片段的長度為100bp-700bp。

8.根據權利要求4或5所述方法，其特征在于，所述序列兩端帶有硫代堿基修飾的接頭包括接頭1和接頭2，其中所述接頭1包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示的DNA分子，所述接頭2包括核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示的DNA分子和核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示的DNA分子。

9.根據權利要求4或5所述方法，其特征在于，所述引物為核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示的DNA分子和核苷酸序列SEQ?ID?NO:6所示的DNA分子。

10.根據權利要求4或5所述方法，其特征在于，所述高保真酶為Phusion超保真DNA聚合酶。