[發(fā)明專利]模式識(shí)別受體RIG-I在制備腫瘤診斷或預(yù)后評(píng)估試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310688018.0
• 申請(qǐng)日: 2013-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN103695543A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周燁;曹雪濤;侯晉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海元一成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，具體涉及模式識(shí)別受體RIG-I在制備腫瘤診斷或預(yù)后評(píng)估試劑盒中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

在病原生物感染機(jī)體的過程中，機(jī)體的固有免疫應(yīng)答首先被激活。固有免疫應(yīng)答的激活主要依賴于機(jī)體免疫細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體（Pattern?recognition?receptors，PRRs）對(duì)病原生物特有成分的識(shí)別。目前發(fā)現(xiàn)的PRR主要分為三類：1、TLRs（Toll-like?receptors）；2、RLHs（RIG-I-like?helicases）；3、NLRs（Nucleotide-oligomerization?domain-like?receptors）。在抗病毒固有免疫應(yīng)答的過程中，病毒成分如DNA或RNA等能夠被免疫細(xì)胞的TLRs和RLHs識(shí)別，進(jìn)而活化下游信號(hào)途徑，促使免疫細(xì)胞活化并表達(dá)促炎癥細(xì)胞因子和Ⅰ型干擾素，提高細(xì)胞的抗病毒活性并能促使病毒感染細(xì)胞的凋亡，從而發(fā)揮清除病毒感染的作用（Takeuchi,O等，MDA5/RIG-I?and?virus?recognition.Curr?Opin?Immunol.2008,20:17-22）。?

RLHs是細(xì)胞內(nèi)識(shí)別病毒RNA的主要受體，主要有兩個(gè)成員：RIG-I(retinoic?acid-inducible?gene?I)和MDA5(melanoma?differentiation-associated?gene5)。RLHs的分子結(jié)構(gòu)由兩部分組成：N端的CARDs（caspase-recruitment?domains）和C端的RNA解螺旋酶結(jié)構(gòu)域。RNA解螺旋酶結(jié)構(gòu)域主要司職病毒RNA的識(shí)別，其結(jié)構(gòu)與Dicer酶相似。CARDs結(jié)構(gòu)域主要司職與下游接頭分子結(jié)合，進(jìn)而傳導(dǎo)活化信號(hào)。在病毒感染或Ⅰ型干擾素刺激的條件下，RLHs的表達(dá)能夠被顯著活化，進(jìn)而發(fā)揮增強(qiáng)病毒RNA識(shí)別及活化其下游抗病毒信號(hào)途徑的作用，達(dá)到清除病毒感染的目的(Meylan?E等，Toll-like?receptors?and?RNA?helicases:two?parallel?ways?to?trigger?antiviral?responses.Mol?Cell.2006,22:561-569)。?

以往研究認(rèn)為，RIG-I主要識(shí)別病毒復(fù)制的產(chǎn)物dsRNA。然而，目前研究表明，5’端磷酸化的病毒RNA才是RIG-I識(shí)別的主要配體。事實(shí)上，絕大多數(shù)胞內(nèi)感染病毒來源的RNA5’端都要經(jīng)過磷酸化修飾，RIG-I也正是通過識(shí)?別RNA的5’端是否有磷酸化修飾來區(qū)分來源于自我和非我的RNA。然而，機(jī)體自身表達(dá)的RNA最初也有5’端的磷酸化修飾，但自身RNA表達(dá)都須在核內(nèi)進(jìn)行剪切或修飾，如mRNA需在5’端進(jìn)行甲基化加帽修飾、tRNA需經(jīng)過5’端的剪切、核糖體RNA需與核糖體蛋白結(jié)合等。因此，在正常情況下機(jī)體自身來源的RNA均不會(huì)在胞漿中激活RIG-I信號(hào)。但是，機(jī)體內(nèi)仍存在少量5’端磷酸化的自身RNA，這些自身RNA如何實(shí)現(xiàn)逃避RIG-I識(shí)別的機(jī)制還不十分清楚(Yoneyama?M等，F(xiàn)unction?of?RIG-I-like?receptors?in?antiviral?innate?immunity.J?Biol?Chem.2007,282:15315-15318)。此外，RIG-I和MDA5雖然同為RLHs家族病毒RNA識(shí)別受體，但它們識(shí)別的病毒種類不盡相同。RIG-I主要識(shí)別的病毒包括水泡性口炎病毒（VSV）、新城雞瘟病毒（NDV）、仙臺(tái)病毒（SeV）、流感病毒（influenza?virus）和乙型腦炎病毒（JEV）等；而MDA5主要識(shí)別小核糖核酸病毒，包括腦心肌炎病毒（EMCV）、腦脊髓炎病毒（Theiler’s?virus）和門戈病毒（Mengo?virus）等(Kato?H等，Differential?roles?of?MDA5and?RIG-I?helicases?in?the?recognition?of?RNA?viruses.Nature.2006,441:101-105)。?