[發明專利]血液樣品預處理方法

有效

• 申請號: 201310687036.7
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN103645264A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發明（設計）人: 許驥;陳杰;陳銳勇;劉曉波;何佳;陳新;向導
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍醫學研究所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張亞利;駱蘇華

技術領域

本發明涉及醫療技術領域，特別涉及一種血液樣品預處理方法。

背景技術

對血液樣品進行預處理是指從血液樣品中提取待測物。后續將通過檢測該待測物的含量、成分等參數，達到疾病檢查、健康檢查的目的。

例如，在現有技術中，肺損傷患者由于肺部富含的彈性纖維組織降解生成特異性產物鎖鏈素（desmosine，DES），造成血漿中鎖鏈素濃度的升高。因此，使用高效液相色譜法（High?Performance?Liquid?Chromatography，HPLC）檢測血漿中DES濃度，根據DES濃度可實現對肺損傷的臨床檢驗及研究。但是，HPLC對血液樣品上樣前的預處理有較為苛刻的要求。

由于血漿中成分復雜，其中DES含量相對較低，傳統的預處理方法較為繁復。傳統的血液樣品預處理方法包括：在試管中加入A溶液和血漿，A溶液用于分離血漿中的雜蛋白；渦旋振蕩，使試管中的A溶液和血漿充分混勻，血漿中的雜蛋白形成絮狀物，鎖鏈素以離子態游離于溶液中；離心，將試管置于離心機中進行離心處理，絮狀物與溶液分離，并沉積在試管底部；萃取，從試管中的上層溶液中提取含有鎖鏈素的溶液至另一試管中；氮氣吹干，使用氮氣吹拂另一試管中的溶液，至液體完全吹干，試管中的干燥粉末包括鎖鏈素成分，整個氮氣吹干過程大概需要7至8個小時；復溶，向裝有吹干的干燥粉末的試管中加入B溶液，干燥粉末再溶解，其中的鎖鏈素以離子狀態游離于B溶液中；過濾，去除復溶溶液中的其他微粒雜質，得到具有鎖鏈素的溶液。具有鎖鏈素離子的溶液用于HPLC檢測。

對傳統的血液樣品的預處理方法進行分析，整個過程過于繁瑣，整個血液樣品預處理時間總耗時長達十幾個小時。氮氣吹干步驟中，在吹干后需要及時停止氮氣吹拂，否則干燥粉末可能被吹跑。而且氮氣吹干步驟花費時間太長，這對操作人員的技術要求和依賴性特別高，需要操作人員實時監測。另外，傳統的血液樣品預處理方法所需血漿樣品較多，一般至少需要0.5～1mL，而且利用率也低。

發明內容

本發明解決的問題是，傳統的血液樣品預處理方法的過程過于繁瑣。

為解決上述問題，本發明提供一種血液樣品預處理方法，所述血液樣品預處理方法包括：

在試管中加入乙腈溶劑和血漿，血漿與乙腈溶劑的體積比大于等于1：3，血漿中的雜蛋白分離形成絮狀物，鎖鏈素附著在絮狀物中；

提取絮狀物；

在所述絮狀物中加入高效液相色譜級酸性水溶液，絮狀物中的鎖鏈素以離子形態游離在所述高效液相色譜級酸性水溶液；

提取具有鎖鏈素離子的高效液相色譜級酸性水溶液。

可選地，所述高效液相色譜級酸性水溶液為甲酸溶液或三氟乙酸溶液，所述甲酸溶液、三氟乙酸溶液的體積濃度范圍為0.5‰～1‰。

可選地，在提取所述絮狀物之前，對裝有乙腈溶劑和血漿的試管進行渦旋振蕩。

可選地，所述提取絮狀物的方法為：進行離心過濾處理，得到甩干的絮狀物，在所述離心過濾過程，離心機的轉速范圍為4000～5000rpm。

可選地，在所述絮狀物中加入高效液相色譜級酸性酸溶液后，靜置2～3min。

可選地，靜置后，對裝有高效液相色譜級酸性水溶液的試管進行渦旋振蕩。

可選地，所述渦旋振蕩的時間范圍為20～30s。

可選地，提取具有鎖鏈素離子的高效液相色譜級酸性水溶液的方法為：進行離心過濾處理，得到具有鎖鏈素離子的高效液相色譜級酸性水溶液，在所述離心過濾過程，離心機的轉速為10000rpm。

可選地，所述離心過濾時間范圍為2～3min。

可選地，在所述血液樣品預處理方法中，使用的試管包括第一管、可分離套裝于第一管中的第二管，

所述第二管具有第一開口和第二開口，所述第一開口具有可橫亙在第一管開口邊緣的延伸件，乙腈溶劑、血漿和高效液相色譜級酸性水溶液通過第一開口進入第二管中；

所述第二管中設置有濾膜，所述濾膜表面與所述第一開口相對，所述濾膜邊緣與第二管內壁貼合，所述濾膜與第一開口之間的第二管部分用于盛裝乙腈溶劑、血漿和高效液相色譜級酸性水溶液；

提取絮狀物過程，使用濾膜過濾第二管中的溶液，第二管中的溶液流入一第一管，絮狀物沉積在濾膜表面；

在提取絮狀物后，分離第一管與第二管，將第二管套裝于另一第一管中；

提取具有鎖鏈素離子的高效液相色譜級酸性水溶液過程，具有鎖鏈素離子的高效液相色譜級酸性水溶液流入另一第一管。

與現有技術相比，本發明的技術方案具有以下優點：