[發明專利]大豆南方莖潰瘍病菌的檢測靶標及其LAMP引物組合物和應用

有效

• 申請號: 201310686657.3
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN103710440A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 鄭小波;沈浩;戴婷婷;王源超;張海峰
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.大豆南方莖潰瘍病菌的檢測靶標序列Tef1-α，其特征在于核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.SEQ?ID?NO.1所示的大豆南方莖潰瘍病菌的檢測靶標序列Tef1-α在檢測或鑒定大豆南方莖潰瘍病菌中的應用。

3.針對權利要求1所述的大豆南方莖潰瘍病菌的檢測靶標序列Tef1-α設計的特異性的LAMP引物組合物，其特征在于包括正向內引物FIP如SEQ?ID?NO.2所示，反向內引物BIP如SEQ?ID?NO.3所示，正向外引物F3如SEQ?ID?NO.4所示，反向外引物B3如SEQ?ID?NO.5所示。

4.權利要求3所述的特異性的LAMP引物組合物在制備檢測或鑒定大豆南方莖潰瘍病菌的試劑中的應用。

5.一種用于檢測大大豆南方莖潰瘍病菌的LAMP檢測試劑盒，其特征在于包含權利要求3所述的特異性的LAMP引物組合物。

6.根據權利要求5所述的用于檢測大豆南方莖潰瘍病菌的LAMP檢測試劑盒，其特征在于所述的試劑盒包含：由20mM正向內引物FIP、20mM反向內引物BIP，10mM正向外引物F3、10mM反向外引物B3，10%10xThermoPol?Reaction?Buffer、50mM?MgSO₄、10mMdNTP?Mixture、5M甜菜堿、8000U/mLBst?DNA?Polymerase?Large?fragment及超純水組成的檢測溶液。

7.一種檢測大豆南方莖潰瘍病菌的方法，其特征在于提取待檢微生物的DNA，以提取的DNA為模板，利用權利要求3所述的特異性的LAMP引物組合物進行LAMP擴增反應；擴增產物加入SYBR?GREENⅠ染料，在常光和/或紫外光下檢測結果，如果反應產物在常光下變顯黃色、在紫外光下產生強烈熒光，則表示存在大豆南方莖潰瘍病菌，在常光下顯橙色、紫外光下無熒光產生則表示不含該病菌。

8.根據權利要求7所述的檢測大豆南方莖潰瘍病菌的方法，其特征在于提取待檢微生物的DNA，取3μl?DNA溶液，加入19.5μl權利要求6所述的檢測溶液和2.5μl滅菌去離子水進行LAMP反應，反應程序為：64℃70min；增產物加入SYBR?GREENⅠ染料，在紫外光下檢測結果，如果反應產物產生強烈熒光，則表示存在大豆南方莖潰瘍病菌，無熒光產生則表示不含該病菌。