[發明專利]一種快速鑒定薔薇屬植物染色體數目的方法

無效

• 申請號: 201310684352.9
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN103710439A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 趙梁軍;寇亞平;趙宏偉;高彬
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鑒定薔薇屬植物的染色體數目的方法，所述方法依次包括如下步驟：

（1）取材步驟：獲取來自薔薇屬植物的材料；

（2）預處理步驟：使用預處理液對所述材料進行處理；

（3）固定步驟：使用固定液對所述材料進行固定；

（4）解離步驟：使用解離溶液對所述材料進行解離；

（5）染色步驟：使用染色溶液對所述材料進行染色；

（6）壓片步驟：對所述材料進行壓片；

（7）鏡檢步驟：通過使用顯微鏡對所述材料進行檢測來確定所述材料的細胞中的染色體的數目；

其中，在所述壓片步驟中，以28至34N的力對所述材料上的蓋玻片垂直敲擊160至200次。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述敲擊分為依次進行的第一遍敲擊和第二遍敲擊，并且使用帶有橡皮末端的未削鉛筆進行，所述第一遍敲擊以28N至34N的力垂直敲擊所述材料上的蓋玻片80-100次，所述第二遍敲擊以相同的力度和次數進行垂直敲擊，并且所述第一遍敲擊使用所述鉛筆的橡皮末端進行，所述第二遍敲擊采用所述鉛筆的另一末端進行。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述壓片步驟通過如下方式進行：將經染色的所述材料放置在載玻片上，然后滴上45體積%的醋酸溶液，蓋上蓋玻片，用吸水材料吸走多余的溶液，蓋上一層濾紙，左手按住蓋玻片的一端，右手拿鉛筆依次進行所述第一遍敲擊和所述第二遍敲擊，最后將蓋玻片壓平并去掉濾紙。

4.如權利要求1至3中任一項所述的方法，其中，所述材料為經過電鏡掃描預檢測確認具有生長點的材料和/或經過電鏡掃描預檢測確認了生長點位置的材料；優選的是，所述材料為選自由根尖、莖尖或花芽組成的材料；更優選的是，所述材料為莖尖和/或花芽；進一步優選的是，所述材料為花芽；另外優選的是，所述莖尖取自于一年生枝條；更優選的是，所述莖尖是長度為1.5mm至3mm的頂芽的頂端組織，所述花芽是長度為1.5mm至2.5mm的花序頂端組織。

5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中，所述材料在上午9:00-11:00或下午3：00至4：00的時間獲取，并且為莖尖和/或花芽，更優選為花芽。

6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中，所述預處理步驟通過如下方式進行：用解剖刀將所述材料切開成兩個部分，放入裝有對二氯苯飽和水溶液的容器中，用封口膜將所述容器密封，使用注射器抽氣至所述材料沉入到處理液的底部，再在20℃至30℃預處理2小時至3小時，然后用水進行清洗。

7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中，所述固定步驟采用如下方式進行：將所述材料放置在裝有卡諾固定液的容器中并將該容器放置在冰盒中固定4小時至6小時，然后用水進行清洗，所述卡諾固定液由體積比例為3:1的無水乙醇和冰醋酸組成。

8.如權利要求1至7中任一項所述的方法，其中，所述解離步驟采用如下方式進行：使用0.8M至1.2M鹽酸水溶液于55℃至65℃水浴中對所述材料解離8分鐘至10分鐘，再用水進行清洗。

9.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其中，所述染色步驟通過如下方式進行：將所述材料放置在裝有染液的容器中染色10分鐘至30分鐘，所述染液為卡寶品紅染液，然后用水進行清洗；優選的是，所述染液的用量為剛好沒過所述材料。

10.如權利要求1至9中任一項所述的方法，其中，所述鏡檢步驟通過如下方式進行：使用100倍顯微鏡找到所述材料的觀察目標范圍，然后使用400倍鏡尋找處于分裂期的細胞，再利用1000倍油鏡觀測染色體的數目；優選的是，先利用1000倍油鏡拍攝圖片，然后再根據圖片對染色體進行計數。