[發(fā)明專利]9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺純度的液相色譜測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310683256.2
• 申請日: 2013-12-16
• 公開（公告）號: CN104713972A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳葉飛
• 申請（專利權(quán)）人: 上海寶鋒工程技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海天協(xié)和誠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31216
• 代理人: 李彥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及應(yīng)用選擇吸附分離的分析方法領(lǐng)域，具體為一種9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺純度的液相色譜測定方法。

背景技術(shù)

9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺（簡稱Fmoc-ONSu）是一種無色或淺黃色針狀晶體，分子式C₁₉H₁₅NO₅，分子量337.3，結(jié)構(gòu)式為：

，

9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺是有機(jī)合成的重要原料，目前主要用作肽合成和抗血栓類藥物中間體。目前對Fmoc-ONSu的合成和應(yīng)用的研究報(bào)道較多，但還沒有公開資料介紹Fmoc-ONSu的分析方法。盡管已有文獻(xiàn)或專利提到Fmoc-ONSu合成產(chǎn)物的液相色譜含量，但對液相色譜的詳細(xì)操作條件都沒有公開，對于采用哪種類型的高效液相色譜柱及具體操作條件都有待詳細(xì)摸索。目前常用的方法是進(jìn)行柱前或柱后衍生，即試樣先和衍生化試劑反應(yīng)生成穩(wěn)定的具有紫外生色團(tuán)或熒光團(tuán)的衍生化產(chǎn)物，再通過紫外光或熒光檢測器獲得相應(yīng)的響應(yīng)，從而可檢測出試樣的實(shí)際含量。這種方法雖然理論上可以用來測定Fmoc-ONSu的真實(shí)含量，但衍生劑稀少，操作手續(xù)繁瑣，有較大缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種操作方便、測定準(zhǔn)確的液相色譜檢測方法，本發(fā)明公開了一種9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺純度的液相色譜測定方法。

本發(fā)明通過如下技術(shù)方案達(dá)到發(fā)明目的：

一種9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺純度的液相色譜測定方法，采用高效液相色譜儀操作，其特征是：按如下方法依次實(shí)施：

a.?設(shè)置高效液相色譜儀：高效液相色譜儀的色譜柱作為固定相，固定相為反相鍵合固定相，即色譜柱的填料選用十八烷基鍵合相硅膠、辛烷基鍵合相硅膠和氰基鍵合相硅膠中的任意一種，填料的粒徑不大于5μm，色譜柱的長度為10cm～50cm，色譜柱的內(nèi)徑為4mm～5mm；

高效液相色譜儀的流動(dòng)相選用水、乙腈、四氫呋喃、環(huán)己烷、正己烷、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷和甲苯中的任意一種；

高效液相色譜儀的檢測器采用多波長可變紫外-可見光檢測器，檢測器所發(fā)射的紫外線的波長在220nm～370nm；

b.?配制標(biāo)樣溶液：以色譜純的流動(dòng)相為溶劑，用容量瓶等儀器將9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的標(biāo)樣配制成濃度為0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作為分析用標(biāo)樣，配制時(shí)用超聲波脫氣溶解并將溶液混合搖勻后作為分析用標(biāo)樣；

c.?配制待測樣品溶液：以色譜純的流動(dòng)相為溶劑，用容量瓶等儀器將含有9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的待測樣品配制成濃度為0.1mg/mL～1.2mg/mL的溶液作為待分析的試樣，配制時(shí)用超聲波脫氣溶解并將溶液混合搖勻后作為分析用標(biāo)樣；

d.?分析標(biāo)樣：待高效液相色譜儀條件穩(wěn)定后，用高效液相色譜儀分析標(biāo)樣，用50μL容量的微量注射器向高效液相色譜儀內(nèi)注入標(biāo)樣，標(biāo)樣各組分得以分離后，得出標(biāo)樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積；

e.?分析試樣：待高效液相色譜儀條件穩(wěn)定后，用高效液相色譜儀分析試樣，用50μL容量的微量注射器向高效液相色譜儀內(nèi)注入試樣，試樣各組分得以分離后，得出試樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積；

f.?計(jì)算純度：采用外標(biāo)法以標(biāo)樣定量試樣的純度，待測樣品中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的純度，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，按下式計(jì)算：

X₁=X₀××——(1)，

(1)式中：

X₁：試樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的純度，以百分比表示，

X₀：標(biāo)樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺的純度，以百分比表示，

A₁：試樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積，

A₀：標(biāo)樣中9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺組分的峰面積，

m₁：試樣的質(zhì)量，

m₀：標(biāo)樣的質(zhì)量。

采用外標(biāo)法分析過程快捷，方便、易操作，分析結(jié)果誤差小，得到的色譜峰峰形尖銳、對稱性好，可作為9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺合成及提純過程中的純度檢測，即適用于各種純度的9-芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺樣品。