[發(fā)明專利]一種提高乳酸菌凍干活性的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310682902.3
• 申請日: 2013-12-13
• 公開（公告）號: CN104711192A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 青島碧水藍(lán)天生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/46;C12R1/225
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域

一種提高乳酸菌凍干活性的方法，屬于酸奶凍干發(fā)酵劑、乳酸菌活菌制劑技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

由于成本和工業(yè)化方面的問題，菌體收集最常用的方法是離心分離法，即借助離心機的離心力作用使菌體沉積，目的就是將菌體與培養(yǎng)基和代謝產(chǎn)物分開，且要盡可能減少對菌體的損傷，此類方法簡便、快速、處理量大，適合商業(yè)化生產(chǎn)。

菌體經(jīng)過富集培養(yǎng)、離心收集和保護劑懸浮后，一般采取的措施就是迅速于低溫下預(yù)凍，預(yù)凍一定時間后就開始冷凍干燥。從保護劑懸浮菌體到預(yù)凍這一步，可以做的工作很多：Broadbent等指出將乳酸乳球菌置于1O℃冷激2h，能提高細(xì)胞凍融后的存活率。國內(nèi)關(guān)于這方面的研究才剛起步，東北農(nóng)大的張?zhí)m威等人發(fā)表過一篇綜述。國外有文獻(xiàn)報道的也僅限于對大腸桿菌和一些嗜溫乳酸菌關(guān)于冷激方面的研究。關(guān)于德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌這兩種常用于酸奶發(fā)酵劑菌種進行預(yù)培養(yǎng)的研究還未見諸報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種提高乳酸菌凍干活性的方法，在菌體經(jīng)過富集培養(yǎng)，離心收集和保護劑懸浮后，先不置于低溫下預(yù)凍，而是把懸浮菌體重新送回一定溫度培養(yǎng)一定時間，然后再冷凍干燥。本發(fā)明把這種處理方法稱為預(yù)培養(yǎng)。預(yù)培養(yǎng)對前面的離心收集過程使菌體造成的損傷有修復(fù)作用，所以能提高乳酸菌凍干活性。本發(fā)明根據(jù)微生物的生理代謝特點，引入了預(yù)培養(yǎng)的思路，最大限度的挖掘凍干酸奶發(fā)酵劑活性提高的關(guān)鍵控制點。

本發(fā)明的技術(shù)方案：酸奶發(fā)酵劑主要由德氏乳桿菌保加利亞亞種和嗜熱鏈球菌兩種菌構(gòu)成。

將這兩種菌分別或按照1：1的配比以2％接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用常規(guī)方法經(jīng)過

富集培養(yǎng)，離心后收集菌體，加入保護劑懸浮，保護劑的用量是菌體濕重量的10-15倍，加保護劑懸浮后的乳酸菌菌體于4℃放置平衡30min，在30-45℃溫度下，經(jīng)過30—120min時間的預(yù)培養(yǎng)后，再進行冷凍干燥。

本發(fā)明所用乳酸菌菌種為德氏乳桿菌保加利亞亞種CTCC6047、嗜熱鏈球菌CTCC6038或以上兩個菌種按質(zhì)量比1：1混合菌種。所用保護劑為：脫脂奶粉8.1g、甘油2.2g、酵母膏0.6g，加水100mL充分混合溶解，保護劑應(yīng)于115.5℃、20min條件下滅菌，滅菌后置于37.1℃下培養(yǎng)三天，確認(rèn)無菌后才能使用。

預(yù)培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為42℃，預(yù)培養(yǎng)的時間優(yōu)選為60分鐘，本方法也適用于乳酸菌活菌制劑或酸奶發(fā)酵劑。

本發(fā)明的有益效果：采用預(yù)培養(yǎng)方式可以修復(fù)離心過程中對菌體造成的損傷，所以能提高乳酸菌凍干活性。本發(fā)明對于用作酸奶發(fā)酵劑乳酸菌，可以縮短凝乳時間。菌體經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)過程，由冷凍干燥前的不活躍狀態(tài)又能回復(fù)到富集培養(yǎng)后的相對活躍狀態(tài)。所選菌株最適預(yù)培養(yǎng)溫度為42℃，最適預(yù)培養(yǎng)時間為60min。將此種狀態(tài)的菌體凍干后，菌體活性顯著提高，凝乳時間比對照組縮短25min。

菌體用保護劑懸浮后不能馬上冷凍，保護劑與菌體細(xì)胞平衡需要一段時間。保護劑與菌體在4℃放置30min以上平衡完成。

經(jīng)過穩(wěn)定性實驗表明，預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞穩(wěn)定性比對照組要好。前者于4℃的條件下貯藏90天后，凝乳時間損失36％；而對照組損失62％。

具體實施方式

實施例1