[發明專利]在體外生成可灌注微血管網絡的方法及設備以及在體外生成內皮親代血管的方法

在審

• 申請號: 201310682666.5
• 申請日: 2008-09-11
• 公開（公告）號: CN103725642A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: T·諾伊曼
• 申請（專利權）人: 諾荑思公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12M3/00
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 李婉婉;張苗

本申請是申請號為200880108504.8、申請日為2008年09月11日、發明名稱為“生成可灌注微血管系統的方法”的中國發明專利申請的分案申請。?

關于聯邦政府贊助研究的聲明?

本發明受政府的支持，是在美國國立衛生研究院國家心臟、肺和血液研究所授予的基金號為1R21HL081152-01的基金的支持下完成的。美國政府在本發明中具有一定的權利。?

相關申請?

本申請是Neumann于2006年03月24日提交的標題為“生成可灌注微血管系統的方法”的共同未決申請U.S.11388920的部分系列申請，并在此基礎上要求了優先權。Neumann的申請U.S.11388920被引入本文作為參考。?

技術領域

本發明涉及用于研究生理的和病理的血管生長以及響應促血管生成因子或抗血管生成因子的血管生長的方法。?

背景技術

在正常的血管生長的過程中（例如，月經周期、胎盤形成、發胖、創傷愈合、炎癥），新血管的生成是被調控的并最終停止。值得關注的是，血管生長失去調控是病理學上的一個關鍵因素。例如，腫瘤的生長、糖尿病性視網膜病變、關節炎和牛皮癬涉及直接促成病理狀態的血管過度增殖。相反，作為老年個體的特征，血管生長的削弱危害了創傷愈合以及由損傷或疾病導?致的缺血組織的血管再生（revascularization）。因此，對指導組裝新血管的機制以及啟動和終止血管生長的過程的理解，是控制疾病中的血管形成的策略發展的核心。?

在新血管的生長過程中（血管生成（angiogenesis）），萌芽（sprout）源自血管內皮細胞，該血管內皮細胞排列成毛細血管和后毛細血管（postcapillary）的內腔（lument）-血管系統的最小分枝。血管生成是一個復雜的、多步驟的過程。盡管公開了數以千計的關于血管生成的研究，但是，對介導和調控血管生成的生長和形態發生的細胞機制了解甚少。?

由于大部分組織的不透明性，很難在體內實時地觀察血管生成萌芽態的具體情況。很難在三維空間重建組織切片，且無法與血管生長的動態性質相聯系。此外，很難在組織切片中發現接近血管生成萌芽的尖端的區域（控制血管侵入（vascular?invasion）和形態發生的關鍵區域）。為了克服傳統組織學的局限性，開發出了多種體內的和體外的血管生成“模型”。?

體內的血管生成模型：為了克服活體組織的不透明性，研究者通過活體動物體內的“窗口”或專門的觀察腔來觀察血管生成，所述動物體內的“窗口”包括兩棲類幼蟲的天然透明的尾（Clark?and?Clark1939），所述專門的觀察腔可以植入到兔的耳朵（Clark?and?Clark1939）、小鼠的皮膚（Algire，Chalkley?et?al，1945）和倉鼠的頰囊（cheek?pouches）（Greenblatt?and?Shubi1968）中，或者由兔角膜囊袋（Gimbrone，Cotran?et?al.1974）或雞胚絨毛尿囊膜（Ausprunk，Knighton?et?al.1974）發展而來。從這些早期的、大量描述性的研究中，得出了對腫瘤誘導的血管化學趨向性的中心范例的驗證，以及能促進血管生長的可擴散的腫瘤衍生分子的相關發現。體內血管生成的新實驗，檢測了血管向聚合海綿體或皮下植入至嚙齒動物的凝膠基底膜蛋白栓塞中的向內生長（Passaniti?Taylor?et?al.1992；Andrade，Machado?et?al.1997；Akhtar，Dickerson?et?al.2002；Koike，Vernon?et?al.2003）。由于下述原因，體?內的方法難以實施：(1)動物之間血管生成反應的種內變異；(2)缺乏從一個物種到另一個物種的結果轉譯；(3)購買和飼養動物的花費高；(4)公眾不贊成以研究為目的使用動物；以及(5)在動物手術和可視化方面以及結果的評估上遇到的復雜性。?