[發(fā)明專利]一種鑒定家鴨、番鴨和半番鴨的DNA標(biāo)記方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310676168.X
• 申請(qǐng)日: 2013-12-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103667489A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭嫩珠;辛清武;繆中緯;朱志明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.一種鑒定家鴨、番鴨和半番鴨的DNA標(biāo)記方法，其特征在于：

在含SNP酶切位點(diǎn)的鴨MC1R基因編碼區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)P1引物，引物序列為：

上游引物F：5'—CGTGCCCAACGA?ACTCTT—3'?；

下游引物R：5'—CAGGGCGAA?CATGTGGA—3'?。

2.一種鑒定家鴨、番鴨和半番鴨的DNA標(biāo)記方法，其特征在于：其具體步驟包括：

（1）對(duì)鴨子采用頸靜脈采血，EDTA抗凝，-20℃保存；基因組DNA試劑盒提取總DNA，端粒酶TE溶解，-20℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（2）利用已設(shè)計(jì)好的引物

上游引物：5'—GCCAGTGAGGGCAACCAG?AG—3'?；

下游引物：5'—CTACCAGGAGCACAGCACCA—3'，分別對(duì)家鴨、番鴨和半番鴨的DNA進(jìn)行擴(kuò)增；產(chǎn)物回收、克隆并正反向測(cè)序；應(yīng)用DNAStar中的SeqMan軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，搜索SNP；

（3）引物的設(shè)計(jì)

在含SNP酶切位點(diǎn)的鴨MC1R基因編碼區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)引物P1，上游引物F與下游引物R；

（4）PCR擴(kuò)增

利用引物P1對(duì)番鴨、半番鴨和家鴨基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為:?2?×?Taq?MasterMix?12.5μL，上游引物F?1μL，下游引物R?1μL，模板?DNA?2μL?，補(bǔ)充ddH2O?至終體積25μL；PCR?反應(yīng)條件：94?℃?5?min，94?℃?50?s，55.5℃?35?s，72℃?40?s，共?35?個(gè)循環(huán)；72?℃?10?min，4?℃保存；PCR?產(chǎn)物經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為?2%?的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果；

（5）PCR-RFLP檢測(cè)

取擴(kuò)增產(chǎn)物5-6μL，加入限制性內(nèi)切酶Hin6Ⅰ1μL，10×Buffer?1μL，加ddH₂O至終體積10μL，37℃酶切反應(yīng)過(guò)夜，酶切產(chǎn)物用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，采用DL1000?DNA?Marker作為分子量的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，觀察酶切結(jié)果，Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)觀察拍照保存，由帶型判斷基因型；

（6）結(jié)果

利用引物P1對(duì)3類鴨群體進(jìn)行擴(kuò)增、克隆測(cè)序比對(duì)，發(fā)現(xiàn)A399G位于限制性酶切Hin6Ⅰ的識(shí)別位點(diǎn)，1個(gè)可用PCR-PFLP方法檢測(cè)SNP的鴨MC1R基因標(biāo)記，即為鑒定家鴨、番鴨和半番鴨的DNA標(biāo)記方法。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種鑒定家鴨、番鴨和半番鴨的DNA標(biāo)記方法，其特征在于：家鴨包括北京鴨、閩農(nóng)白鴨、莆田黑鴨、山麻鴨、臺(tái)灣白改鴨、卡其康貝爾鴨。