[發(fā)明專利]奶牛乳房炎白色念珠菌快速診斷試紙條

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310674116.9
• 申請(qǐng)日: 2013-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN103616514A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉平;何寶祥;黃云飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種奶牛乳房炎白色念珠菌快速診斷試紙條，包括吸水紙、分析膜、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、樣品墊和底板，其特征在于：所述分析膜含有用抗白色念珠菌單克隆抗體包被的檢測(cè)線以及用羊抗兔IgG包被的質(zhì)控線，所述金標(biāo)抗體結(jié)合墊包被膠體金標(biāo)記的白色念珠菌抗兔多克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奶牛乳房炎白色念珠菌快速診斷試紙條，其特征在于：所述抗白色念珠菌單克隆抗體是利用雜交融合技術(shù)篩選出白色念珠菌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株而得；所述白色念珠菌抗兔多克隆抗體是應(yīng)用白色念珠菌顆粒性抗原多次免疫新西蘭大白兔而得。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的奶牛乳房炎白色念珠菌快速診斷試紙條，其特征在于：所述分析膜為硝酸纖維膜，金標(biāo)抗體結(jié)合墊為玻璃纖維膜。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述奶牛乳房炎白色念珠菌快速診斷試紙條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）制備白色念珠菌抗體

抗白色念珠菌單克隆抗體是采用乳化的白色念珠菌作為抗原，分階段多次免疫Balb/c小鼠，再進(jìn)行細(xì)胞融合，篩選出陽(yáng)性雜交細(xì)胞株后，制備腹水而得；白色念珠菌抗兔多克隆抗體是采用白色念珠菌作為抗原多次免疫新西蘭大白兔制備而得；

（2）制備分析膜

將步驟（1）制備的白色念珠菌單克隆抗體在硝酸纖維膜包被形成檢測(cè)線，羊抗兔IgG在硝酸纖維膜包被形成質(zhì)控線，備用；

（3）制備金標(biāo)抗體結(jié)合墊

采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液，并采用標(biāo)記體系標(biāo)記白色念珠菌抗兔多克隆抗體，將金標(biāo)抗體在支持膜上固相化；

（4）組裝試紙條

將步驟（2）的分析膜、步驟（3）的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、吸水紙、樣品墊、底板組裝成膠體金快速檢測(cè)試紙條。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的奶牛乳房炎白色念珠菌快速診斷試紙條的制備方法，其特征在于步驟（3）中所述的標(biāo)記體系為：膠體金顆粒在20nm以下，抗體蛋白與膠體金結(jié)合的pH值為8～9，結(jié)合膠體金的抗體蛋白量為20～40μg/mL，穩(wěn)定劑為10%PEG20000，膠體金復(fù)合物緩沖液的組分為pH值為8～9的Tris–HCl緩沖液、1%BSA、0.5%PEG20000、10%蔗糖和2%Tween–20。