[發(fā)明專利]奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310673972.2
• 申請(qǐng)日: 2013-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103627812A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何寶祥;陳亞明;杜向宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括由四對(duì)特異性引物構(gòu)成的引物對(duì)組；四對(duì)特異性引物分別是鑒定無(wú)乳鏈球菌sip基因的引物對(duì)sip-F和sip-B，鑒定金黃色葡萄球菌Nuc基因的引物對(duì)Nuc-F和Nuc-B，鑒定大腸桿菌rrnB基因的引物對(duì)rrnB-F和rrnB-B，鑒定蠟樣芽孢桿菌HblA基因的引物對(duì)HblA-F和HblA-B；所述引物對(duì)sip-F和sip-B、引物對(duì)Nuc-F和Nuc-B、引物對(duì)rrnB-F和rrnB-B、引物對(duì)HblA-F和HblA-B的特異性引物分別具有序列表SEQ.ID.No.1和2、4和5、7和8、10和11的堿基序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括以下試液：

A試液：含10×PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs和四對(duì)特異性引物；

B試液：含無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌的DNA,作為陽(yáng)性對(duì)照；

C試液：去離子水，作為陰性對(duì)照。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述A試液每管42μl，含10×PCR緩沖液5μl、2.5mM?MgCl₂5μl、2.5mmol/L的dNTPs4μl、四對(duì)特異性引物包括：無(wú)乳鏈球菌上游和下游引物各2μl、金黃色葡萄球菌上游和下游引物各2μl、大腸桿菌上游和下游引物各2μl、蠟樣芽孢桿菌上游和下游引物各2μl，引物濃度均為10μmol/L，5U/μl?Taq酶0.5μl，去離子水11.5μl。

4.奶牛乳房炎主要致病菌四重PCR快速檢測(cè)試劑盒的引物對(duì)組，其特征在于包括四對(duì)特異性引物，分別是鑒定無(wú)乳鏈球菌sip基因的引物對(duì)sip-F和sip-B，鑒定金黃色葡萄球菌Nuc基因的引物對(duì)Nuc-F和Nuc-B，鑒定大腸桿菌rrnB基因的引物對(duì)rrnB-F和rrnB-B，鑒定蠟樣芽孢桿菌HblA基因的引物對(duì)HblA-F和HblA-B；所述引物對(duì)sip-F和sip-B、引物對(duì)Nuc-F和Nuc-B、引物對(duì)rrnB-F和rrnB-B、引物對(duì)HblA-F和HblA-B的特異性引物分別具有序列表SEQ.ID.No.1和2、4和5、7和8、10和11的堿基序列。