[發明專利]一種伊維菌素化學發光酶聯免疫快速檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201310673734.1
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN103675287A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 王善普;鄭鳴;郭宏偉;靳婉霞;吳庭才
• 申請（專利權）人: 洛陽萊普生信息科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時國珍

技術領域

本發明涉及一種伊維菌素的檢測試劑盒，具體的說是一種伊維菌素化學發光酶聯免疫快速檢測試劑盒。?

背景技術

20世紀90年代以后，絕大多數測定食品中伊維菌素類藥物殘留的理化檢測法主要依靠液相色譜技術進行分離，其次是色／質譜聯用技術，氣相色譜法、高效薄層色譜法等檢測法，因其各自特有的性能，在抗生素殘留檢測方面稍有應用。色譜法檢測牛乳中的藥物殘留要經過樣品處理（包括樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟）、殘留藥物的分離和殘留藥物的檢測。理化檢測法利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應或性質來測定其含量，能進行定性、定量分析和藥物鑒定，可作為乳中抗生素檢測的確證方法。該法檢測敏感性較高，但儀器及檢測費用高、檢測程序復雜、較耗時間等，這些不利因素使該法僅限于實驗室乳樣測定。?

免疫學分析法是以抗原與抗體的特異性、可逆性結合反應為基礎的分析方法，目前藥物殘留免疫分析技術主要分三大類：相對獨立的分析方法、免疫分析技術與常規理化分析技術聯用的方法、免疫受體法。1973年荷蘭van?weeman、schμrrs及瑞典Engvall、Perlmann分別提出酶聯免疫吸附法，30多年來國內外學者對免疫學方法檢測食品中抗生素進行了大量研究。但由于抗生素是半抗原，抗原構建技術難度大、免疫特異性強、檢測成本高，目前IDEXX實驗室公司、Cha瑚Sciences等公司在免分析法方面的研究較為成熟，國內該技術仍處于研究發展中。當前主要是用酶聯免疫吸附試驗、放射性免疫發光法、熒光免疫法、化學發光法等，對比現有的幾種標記免疫技術靈敏度的可知酶免與發光相比較，其酶免靈敏度較低。?

發明內容

為了解決上述現有技術存在的缺陷，本發明提供了一種靈敏度高、檢測范圍寬、操作簡便快速、無毒無污染且所用儀器簡單經濟的檢測伊維菌素的化學發光酶聯免疫分析測定試劑盒，同時提供了其制備方法，以及檢測樣品中伊維菌素抗生素類的方法。?

本發明為解決上述技術問題所采用的技術方案為：伊維菌素的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，設在盒體內的酶標板和設在盒體內試劑；所述酶標板的各孔包被有包被抗原，其中包被抗原由伊維菌素的代謝物與卵清蛋白偶聯制成；所述試劑包括：伊維菌素的單克隆抗體、酶標二抗即辣根過氧化酶標記的羊抗鼠的抗體、伊維菌素系列標準溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、發光液。?

所述酶標板為不透明的聚苯乙烯8孔×12條的96孔化學發光酶標板。?

所述包被抗原濃度為5μg/ml。?

所述伊維菌素單克隆抗體的工作濃度為1:15000。?

所述伊維菌素的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒：?所述伊維菌素的單克隆抗體是由伊維菌素的代謝物與分子量范圍是6.7KDa~6.8?KDa的牛血清蛋白偶合制成的偶聯物作為免疫原免疫小鼠制備得到。?

一種使用上述伊維菌素的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒檢測殘余伊維菌素的方法，包括以下步驟：?

1）加樣：向酶標板中加入50μL/孔的伊維菌素系列標準濃度溶液或樣品溶液，然后加入伊維菌素抗體工作液50μL/孔，室溫（25℃)恒溫孵育2.5h；

2）洗滌：傾出孔中液體，向酶標板中加入200μL/孔的洗滌液，靜置5min后拍干，重復三次；

3）加酶標二抗：每孔加入酶標二抗工作液100μL，室溫恒溫孵育1.5h；

4）洗滌：傾出孔中液體，向酶標板中加入280μL/孔的洗滌液，靜置5min后拍干，重復三次；

5）加發光液：每孔加入發光液l00μL；

6）檢測：用化學發光免疫分析儀測定每孔的發光強度；

7）結果判定：以所測得的標準品發光值，除以第一個標準（0標準）的發光值再乘以100，得到抑制率（B/B0%），以抑制率為縱坐標，伊維菌素濃度的對數為橫坐標作標準曲線，每一個樣品的濃度可以從標準曲線上讀出。

有益效果：本發明所制備的伊維菌素的化學發光酶聯免疫檢測試劑盒具有作為化學發光免疫分析最關鍵靈的優越的高靈敏度，其靈敏度可達0.01-5ng/ml，而且具有寬的線性動力學范圍，光信號持續時間長，其產生的光信號持續時間可達數小時甚至一天，分析方法簡便快速結果穩定、誤差小，樣品系直接自己發光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結果靈敏穩定可靠，安全性好及使用期長。?

具體實施方式