[發(fā)明專利]一種伊維菌素化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫快速檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310673734.1
• 申請日: 2013-12-12
• 公開（公告）號: CN103675287A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王善普;鄭鳴;郭宏偉;靳婉霞;吳庭才
• 申請（專利權(quán)）人: 洛陽萊普生信息科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 洛陽公信知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時國珍

1.一種伊維菌素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，包括盒體，設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和設(shè)在盒體內(nèi)試劑；所述酶標(biāo)板的各孔包被有包被抗原，其中包被抗原由伊維菌素的代謝物與卵清蛋白偶聯(lián)制成；所述試劑包括：伊維菌素的單克隆抗體、酶標(biāo)二抗即辣根過氧化酶標(biāo)記的羊抗鼠的抗體、伊維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、發(fā)光液。

2.如權(quán)利要求1所述的伊維菌素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述酶標(biāo)板為不透明的聚苯乙烯8孔×12條的96孔化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板。

3.如權(quán)利要求1所述的伊維菌素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述包被抗原濃度為5μg/ml。

4.如權(quán)利要求1所述的伊維菌素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述伊維菌素單克隆抗體的工作濃度為1:15000。

5.如權(quán)利要求1所述的伊維菌素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述伊維菌素的單克隆抗體是由伊維菌素的代謝物與分子量范圍是6.7KDa~6.8?KDa的牛血清蛋白偶合制成的偶聯(lián)物作為免疫原免疫小鼠制備得到。

6.一種利用權(quán)利要求1所述的伊維菌素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測殘余伊維菌素的方法，，使用伊維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為：0.1ng/mL（0標(biāo)準(zhǔn)）、0.5ng/mL、?0.8ng/mL?、lng/mL、5ng/mL、10ng/mL，其特征在于，包括以下步驟：

1）加樣：向酶標(biāo)板中加入50μL/孔的伊維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液或樣品溶液，然后加入伊維菌素抗體工作液50μL/孔，室溫（25℃)恒溫孵育2.5h；

2）洗滌：傾出孔中液體，向酶標(biāo)板中加入200μL/孔的洗滌液，靜置5min后拍干，重復(fù)三次；

3）加酶標(biāo)二抗：每孔加入酶標(biāo)二抗工作液100μL，室溫恒溫孵育1.5h;

4）洗滌：傾出孔中液體，向酶標(biāo)板中加入280μL/孔的洗滌液，靜置5min后拍干，重復(fù)三次；

5）加發(fā)光液：每孔加入發(fā)光液l00μL；

6）檢測：用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定每孔的發(fā)光強(qiáng)度；

7）結(jié)果判定：以所測得的伊維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液對應(yīng)的孔的發(fā)光值，除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的發(fā)光值再乘以100，得到抑制率B/B0%，以抑制率為縱坐標(biāo)，各伊維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品溶液所對應(yīng)的孔的發(fā)光值和所得標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到樣品溶液的濃度。