[發(fā)明專(zhuān)利]一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310672040.6
• 申請(qǐng)日: 2013-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103645149A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱康玲;陳晶;王定官;田乾位;葛志鵬;于飛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/31
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專(zhuān)利中心 42201
• 代理人: 曹葆青

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分光光度計(jì)檢測(cè)技術(shù)，涉及一種采用扣除干擾的紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)方法，此法同時(shí)測(cè)定樣品中兩類(lèi)主要化合物的含量；具體是一種同時(shí)分析總黃酮和綠原酸含量的簡(jiǎn)便方法，特別是一種同時(shí)分析金銀花及其提取液、提純物或者其它類(lèi)似植物草藥中的總黃酮與綠原酸含量的方法。

背景技術(shù)

綠原酸和黃酮在植物中分布很廣，其中黃酮一般以幾種結(jié)構(gòu)相似或相近的成分共存于植物中，其總量稱(chēng)為總黃酮含量。綠原酸具有利膽、抗菌、抗病毒、降壓、消炎及升高白細(xì)胞、止血、縮短血凝和出血時(shí)間及興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理功能，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)綠原酸還具有抗HIV病毒和抗腫瘤等作用。黃酮類(lèi)化合物具有軟化血管，降血糖，降低心肌耗氧量，抗心律不齊，降血脂等作用，同時(shí)還具有抗衰老和增加機(jī)體免疫力功能。因?yàn)閮烧呔哂歇?dú)特的生物活性，在醫(yī)藥、食品和日用化工等領(lǐng)域有著越來(lái)越廣泛的應(yīng)用前景。

金銀花是我國(guó)民間一種常用的中草藥，其中同時(shí)含有黃酮類(lèi)化合物和綠原酸等生物活性成分，對(duì)金銀花及其提取液、提純物中總黃酮與綠原酸含量的準(zhǔn)確分析一直沒(méi)有得到很好的解決。分析綠原酸和總黃酮含量的方法較多，應(yīng)用最多的是紫外分光光度法，當(dāng)用傳統(tǒng)的NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH顯色方法來(lái)測(cè)定金銀花及其提取和提純產(chǎn)品中的黃酮含量時(shí)，因?yàn)樵诓ㄩL(zhǎng)510nm處綠原酸等多酚類(lèi)物質(zhì)也有顯色紅移作用(見(jiàn)附圖1)，分析誤差很大。用直接法測(cè)定總黃酮含量時(shí)，一般選擇波長(zhǎng)368nm處最大吸收峰進(jìn)行分析，但因?yàn)榫G原酸在波長(zhǎng)368nm處有一定的吸光作用(見(jiàn)附圖2)，測(cè)定結(jié)果明顯偏高。而對(duì)于綠原酸的測(cè)定，傳統(tǒng)采用在330nm波長(zhǎng)處的直接法測(cè)定，從附圖2可知在330nm波長(zhǎng)處蘆丁對(duì)照品的吸光值較高，結(jié)果使得綠原酸的含量嚴(yán)重偏大。

綜上所述，金銀花中同時(shí)含有綠原酸和黃酮，由于兩者之間互相干擾，使現(xiàn)有的紫外分光光度法的分析結(jié)果誤差大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，目的在于解決目前分析誤差大，分析過(guò)程復(fù)雜，兩類(lèi)化合物不能同時(shí)檢測(cè)等問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)對(duì)黃酮與綠原酸含量進(jìn)行準(zhǔn)確、快捷分析。

本發(fā)明提供的一種總黃酮和綠原酸含量的同時(shí)檢測(cè)方法，該方法包括下述步驟：

第1步采用與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相同的方式對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行氯化鈷顯色處理；

第2步測(cè)定經(jīng)氯化鈷顯色反應(yīng)后的待測(cè)樣品溶液分別在256nm、330nm波長(zhǎng)處的吸光度I₂₅₆、I₃₃₀；

第3步計(jì)算樣品溶液中綠原酸在330nm波長(zhǎng)處已扣除黃酮干擾的吸光度以及黃酮在256nm波長(zhǎng)處已扣除綠原酸干擾的吸光度即：

I330L=AA-BI330-A×BA-BI256,I256R=AA-BI256-1A-BI330]]>

其中，A為同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在256nm和330nm波長(zhǎng)處綠原酸吸光度的比值關(guān)系，B為同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在256nm和330nm波長(zhǎng)處蘆丁吸光度的比值關(guān)系；

第4步利用綠原酸和蘆丁對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，分別計(jì)算得到綠原酸和黃酮的含量。