[發明專利]莫沙必利活性代謝物

無效

• 申請號: 201310667704.X
• 申請日: 2013-12-10
• 公開（公告）號: CN104693138A
• 公開（公告）日: 2015-06-10
• 發明（設計）人: 趙龍山;熊志立;孫曉紅;李發美
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: C07D265/30
• 分類號: C07D265/30;A61P1/14
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 李宇彤

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及莫沙必利的活性代謝物的制備方法及其活性研究。

背景技術

莫沙必利(mosapride)，(±)-4-氨基-5-氯-2-乙氧基-N-[[4-(4-氟芐基)-2-嗎啉基]甲基]苯甲酰胺，是一強效、選擇性苯甲酰胺類5-HT4受體激動劑，作為新型胃動力藥，其越來越多地用于日本和其它一些亞洲國家。莫沙必利具有以下的化學結構：

莫沙必利與大腦神經細胞突觸膜上的多巴胺D2受體、腎上腺素α1受體、5-HT1及5-HT2受體無親和力，故不會引起錐體外系綜合征及心血管不良反應。不良反應的發生率約為4%。主要表現為腹瀉、腹痛、口干、皮疹、倦怠、頭暈、不適、心悸等。另有約3.8%的病人出現檢驗指標異常變化，表現為嗜酸性粒細胞增多、甘油三酯升高，ALT升高等。基于以上不良反應，因此尋找可能具有相等或更高促胃動力作用的相關結構的化合物的研究就有重要的價值。本專利旨在提供一種低毒、高效的莫沙必利的活性代謝物，從而為以后臨床上成為莫沙必利的替代物。

發明內容

本發明旨在提供一種低毒、高效的莫沙必利的活性代謝物，從而為以后臨床上成為莫沙必利的替代物。本發明提供的代謝物如下所示：

本發明的實施方案將在下面的說明中闡述，下列提供的實施例不意味以任何方法限定發明，僅僅是說明性目的。

具體實施方式

實施例1

該代謝物的制備方法為：

（1）代謝物的制備：將培養好的雅致小克銀漢霉AS3.156(市場上購得)預培養24h后，加入莫沙必利DMF(N,N-二甲基甲酰胺)溶液(80mg/ml），使底物濃度達到200mg/L，轉化120h，轉化培養物于4000rpm離心20min，收集上清轉化液約3L，置-20℃冷凍，用于制備莫沙必利代謝物。同時，將離心后的菌絲體沉淀收集在一起，以2倍體積量的乙酸乙酯超聲20min，于4000rpm離心20min，收集上清液，重復以上步驟兩次，合并洗菌絲體的乙酸乙酯，置-20℃冷凍，用于制備莫沙必利代謝物。

（2）代謝物的分離純化：將轉化液用飽和Na₂CO₃堿化至pH=9，以2倍量乙酸乙酯萃取2次，合并有機層，與洗菌絲體的乙酸乙酯層合并，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干，殘渣用約8.0mL甲醇-水(7:3,v/v)復溶，上樣至填充有Sephadex?G10填料的內徑約5cm的凝膠柱，以甲醇為洗脫溶劑，每8mL收集一瓶。洗脫流份經UPLC-MS檢測，將含有代謝物的流份合并，減壓蒸干，用甲醇溶解，運用ODS開放柱色譜法，以甲醇-水混合溶劑系統進行梯度洗脫(10:90，30:70，50:50，70:30，90:10)，每50mL收集一瓶。洗脫流份經UPLC-MS檢測，合并含代謝物的流份，減壓蒸干；用甲醇復溶，用于進一步制備液相色譜分離純化。將含有代謝物的甲醇溶液重復進入制備液相色譜多次，分別收集不同保留時間的色譜流出物，將保留時間相同的流份合并，減壓蒸干有機溶劑，剩下的部分冷凍干燥，即得到該代謝物的純品。所采用的制備液相色譜條件為色譜柱：Zorbax?C18柱（10.7×250mm?I.D.，7μm，美國安捷倫公司）；流動相：甲醇-10mmol/L醋酸銨水溶液(45:55,v：v)，等度洗脫；流速：20.0mL/min；檢測波長274nm；柱溫：室溫。

實施例2代謝物的結構確認

綜合利用NMR、TOF-MS、UPLC-MS/MS及UV對代謝物II進行了結構確證。

熔點：99-101℃。保留時間為2.54min。TOF-MS分析表明，準分子離子峰[M+H]⁺的m/z342.1212(計算值為342.1215)，表明分子式為C₁₅H₂₀ClN₃O₄。MS/MS結果表明，其碎片離子為m/z314、198和170。