[發明專利]重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑、其制備和應用有效
| 申請號： | 201310666859.1 | 申請日： | 2013-12-11 |
| 公開（公告）號： | CN103690569B | 公開（公告）日： | 2016-11-02 |
| 發明（設計）人： | 姜偉;朱長軍;董智雄 | 申請（專利權）人： | 天津億海生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61K48/00 | 分類號： | A61K48/00;C12N15/86;C12N15/113;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 王玉松 |
| 地址： | 300384 天津市新技術*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 相關 病毒 aav shcdc6 制劑 制備 應用 | ||
1.重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑，其特征在于：含有重組腺相關病毒AAV-shCdc6；所述重組腺相關病毒AAV-shCdc6是將特異性人Cdc6RNAi靶向序列的小分子干擾RNA(siRNA)插入AAV的特異位點后得到的。
2.根據權利要求1所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑，其特征在于：所述特異性人Cdc6RNAi靶向序列如SEQ?ID?NO-1所示。
3.根據權利要求1所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑，其特征在于：所述制劑中病毒滴度為每毫升5×1013。
4.權利要求1-3任一項所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
(1)確定人Cdc6siRNA靶向序列第1091至1110堿基；
(2)化學合成引物；
(3)上述引物退火后，連接入腺病毒載體pAAV-GFP，得到pAAV-GFP-shCdc6；
(4)應用pAAV-GFP-shCdc6和輔助載體質粒pAAV-RC2和pHelper共轉染293T細胞；
(5)細胞培養2天后，收集細胞培養上清，以1：100比例稀釋再次感染293T細胞；
(6)細胞培養2天后，收集細胞培養上清，離心收集病毒濃縮液。
5.根據權利要求4所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)中的人Cdc6siRNA靶向序列第1091至1110堿基如SEQ?ID?NO.1所示。
6.根據權利要求4所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中的引物包括：
引物1：5’-GATTC?gagatcaggttctggacaaA-3’，如SEQ?ID?NO.2所示；
引物2：5'-AGCTTttgtccagaacctgatctcG-3’，如SEQ?ID?NO.3所示。
7.權利要求1-3任一項所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑在制備治療乳腺癌的藥物中的應用。
8.權利要求1-3任一項所述的重組腺相關病毒AAV-shCdc6制劑在制備抑制乳腺腫瘤的藥物中的應用。
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