[發明專利]金黃色葡萄球菌HI重組蛋白的發酵和純化工藝

有效

• 申請號: 201310664256.8
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN103695508A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 敬海明;董衍東;劉唯;鄒全明;曾浩;章金勇;吳翼
• 申請（專利權）人: 重慶原倫生物科技有限公司;中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K19/00;C07K1/22;C07K1/18;C12R1/19
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 黃澤雄;陳悅軍

1.一種HI重組蛋白基因工程菌的發酵工藝，包括將一定量的種子菌接種于含有甘油和一定溶氧量的培養基中，經誘導劑誘導一定時間而表達重組蛋白。?

2.根據權利要求1所述的工藝，其中，所述培養基是動物源性TB、動物源性M9、植物源性TB或植物源性M9。?

3.根據權利要求1所述的工藝，其中，所述種子菌的接種量是5%～15%，優選為10%。?

4.根據權利要求1所述的工藝，其中，所述甘油量為5-15ml/L培養基，優選為10ml/L培養基。?

5.根據權利要求1所述的工藝，其中，所述溶氧量是25%～65%，優選為45%。?

6.根據權利要求1所述的工藝，其中，所述誘導劑可以是乳糖或IPTG，所述誘導劑的濃度是0.1～1mM，優選為0.2mM；誘導溫度為16～37℃，優選為30℃；誘導時間為1～6小時，優選為5小時。?

7.根據權利要求1-6任一項所述的工藝，其中，所述工程菌是含有能夠表達HI蛋白的大腸桿菌；優選地，所述大腸桿菌是XL-1Blue；所述載體是pGEX-6p-2。?

8.一種在如權利要求1-7任一項所述的HI重組蛋白工程菌發酵工藝之后純化HI重組蛋白工藝，包括依次進行的GST-瓊脂糖凝膠4B親和層析、陽離子交換層析、置換緩沖液及去內毒素。?

9.根據權利要求8所述的工藝，其中，所述陽離子交換層析使用MMC層析柱，使用的緩沖液為，緩沖液A:25mM?NaAC-HAC，pH4.5，緩沖液B:50mM?PB+1M?NH₄Cl，pH7.0；上樣流速為4.7ml/min，洗脫流速：4.7ml/min；洗脫程序：0-100%B，20個柱體積（CV）；優選地，上樣pH值為7.0-7.5，洗脫pH值為11.0；所述置換緩沖液使用G25層析柱，使用緩沖液為疫苗稀釋液；所述去內毒素使用Q?HP層析柱，使用緩沖液為，緩沖液A：疫苗稀釋液，緩沖液B:1M?NaOH。?

10.根據權利要求8或9所述工藝，在純化之前，對HI工程菌進行菌體破碎，以將重組蛋白從菌體中釋放出來。?