[發明專利]狐貍尾蘭組織培養方法

在審

• 申請號: 201310660996.4
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103651136A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 高宏秀;強承魁;張光琴;張瑩
• 申請（專利權）人: 徐州生物工程職業技術學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所 32220
• 代理人: 周愛芳

技術領域

本發明涉及一種狐貍尾蘭組織培養方法。

背景技術

狐貍尾蘭(Rhynchos?tylis?gigantea)又名鉆喙蘭、海南鉆喙蘭、狐尾蘭,為蘭科鉆喙蘭尾多年生附生草本，其在野生環境下多附生于橡膠樹、楓樹或榕樹上，是我國海南野生名優蘭品種之一。狐貍尾蘭葉片肥厚、翠綠，寬帶狀,外彎，多有數條淺色的縱條紋，莖直立,具數節,不分枝。狐貍尾蘭花序直立或呈下垂狀，且花序多而密集；花瓣比萼片小；其唇瓣呈淺3裂或不裂狀；距兩側壓扁；蕊柱短，蕊柱足較短；花粉塊2個，有不同程度的裂隙，呈蠟質狀；具有狹長的蕊喙柄以及較小粘盤，花期通常在1-3月。狐貍尾蘭的花色也較為豐富，有紅、粉紅、白、藍、橘等顏色。由于其花型獨特，花色豐富，花期長，且花期為我國傳統春節前后,是極好的新春賀歲花卉，因此受到人們的極度喜歡^[1]。

然而，由于我國海南地區熱帶森林過量采伐,致使野生狐貍尾蘭的自然生境受到嚴重破壞,加上人為的過度采集出售,致使野生狐貍尾蘭數量銳減,嚴重影響了狐貍尾蘭生態群的構成。且由于狐貍尾蘭的種子在自然條件下不易萌發,采用種子繁殖很難獲得后代，雖然可以采取分株方法,但是這種方法不僅繁殖系數低,且繁殖速度非常慢,遠遠不能滿足市場的需求^[2]。

目前，通過組織培養的技術來快速繁殖已在很多蘭科植物普遍應用，比較常見的如蝴蝶蘭、大花蕙蘭等。

發明內容

本發明提供一種狐貍尾蘭組織培養方法，為狐貍尾蘭工廠化育苗提供科學依據。

本發明是以如下技術方案實現的：一種狐貍尾蘭組織培養方法，以狐貍尾蘭未成熟種子作外植體,應用組織培養等生物技術對狐貍尾蘭類原球莖體誘導、增殖和催根并獲得狐貍尾蘭組織培養所需培養基的最佳條件；具體步驟如下：

1）無菌材料的獲得

用去離子水沖洗狐貍尾蘭果實表面,然后在超凈工作臺上用80%酒精表面消毒果實2min,無菌水沖洗3次,再用無菌濾紙吸干水分,然后用解剖刀切開莢果,取出細小種子,輕輕將種子均勻散落到固體培養基上,每平板接種量為55粒種子；

2）類原球莖體誘導

把狐貍尾蘭的種子分別接種于誘導培養基中,誘導原球莖(類原球莖體)的形成。培養基組成成分如下：VW+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；

3）培養方式的篩選

將誘導出的類原球莖體接種在1/2MS培養基上，分別采用固體培養和液體轉動培養兩種方式，4次重復，每個處理接種20個三角瓶；四周后統計類原球莖體的增殖倍數；其增殖倍數=新長出的類原球莖體/接種類原球莖體數；

4）植物生長調節劑濃度的篩選

以1/2MS為基本培養基，添加不同濃度的BA,KT,IBA?NAA這四種生長調節劑,分別進行單因素試驗，每處理4次重復，每個處理接種20個三角瓶；四周后統計類原球莖體的增殖倍數，計算方法同步驟3）；

5）不同添加物對類原球莖體的褐化

以1/2MS為基本培養基，在培養基中分別添加不同濃度的維生素C、活性炭AC和Na₂S₂O₃；分別進行單因素試驗，每處理3次重復，每個處理接種20個三角瓶；50天后觀察并記錄類原球莖體褐化和生長狀況。

本發明的有益效果是：本發明通過對不同條件下類原球莖體增殖倍數的研究，來明確培養基中各種成分的作用方式，最終得出如下結論：1）液體培養基有利于類原球莖體短期的快速增殖，長期繼代培養及保存類原球莖體時選用固體1/2MS培養基適宜；（2）在培養過程中，施加1mg/L的BA的效果更優，可以增加類原球莖體的數目，又不會引起玻璃化的產生；（3）在培養基中加入1.0g/L維生素C可以有效抑制外植體的褐化。

具體實施方式

實施例1

1）無菌材料的獲得

用去離子水沖洗狐貍尾蘭果實表面,然后在超凈工作臺上用80%酒精表面消毒果實2min,無菌水沖洗3次,再用無菌濾紙吸干水分,然后用解剖刀切開莢果,取出細小種子,輕輕將種子均勻散落到固體培養基上,每平板接種量為55粒種子；

2）類原球莖體誘導

把狐貍尾蘭的種子分別接種于誘導培養基中,誘導原球莖(類原球莖體)的形成。培養基組成成分如下：VW+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；

3）培養方式的篩選