[發(fā)明專利]狐貍尾蘭組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310660996.4
• 申請日: 2013-12-06
• 公開（公告）號: CN103651136A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高宏秀;強(qiáng)承魁;張光琴;張瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 徐州市三聯(lián)專利事務(wù)所 32220
• 代理人: 周愛芳

1.一種狐貍尾蘭組織培養(yǎng)方法，其特征在于：以狐貍尾蘭未成熟種子作外植體,應(yīng)用組織培養(yǎng)等生物技術(shù)對狐貍尾蘭類原球莖體誘導(dǎo)、增殖和催根并獲得狐貍尾蘭組織培養(yǎng)所需培養(yǎng)基的最佳條件；具體步驟如下：

1）無菌材料的獲得

用去離子水沖洗狐貍尾蘭果實(shí)表面,然后在超凈工作臺上用80%酒精表面消毒果實(shí)2min,無菌水沖洗3次,再用無菌濾紙吸干水分,然后用解剖刀切開莢果,取出細(xì)小種子,輕輕將種子均勻散落到固體培養(yǎng)基上,每平板接種量為55粒種子；

2）類原球莖體誘導(dǎo)

把狐貍尾蘭的種子分別接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)原球莖(類原球莖體)的形成；培養(yǎng)基組成成分如下：VW+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；

3）培養(yǎng)方式的篩選

將誘導(dǎo)出的類原球莖體接種在1/2MS培養(yǎng)基上，分別采用固體培養(yǎng)和液體轉(zhuǎn)動培養(yǎng)兩種方式，4次重復(fù)，每個處理接種20個三角瓶；四周后統(tǒng)計(jì)類原球莖體的增殖倍數(shù)；其增殖倍數(shù)=新長出的類原球莖體/接種類原球莖體數(shù)；

4）植物生長調(diào)節(jié)劑濃度的篩選

以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的BA,KT,IBA?NAA這四種生長調(diào)節(jié)劑,分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)，每處理4次重復(fù)，每個處理接種20個三角瓶；四周后統(tǒng)計(jì)類原球莖體的增殖倍數(shù)，計(jì)算方法同步驟3）；

5）不同添加物對類原球莖體的褐化

以1/2MS為基本培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中分別添加不同濃度的維生素C、活性炭AC和Na₂S₂O₃；分別進(jìn)行單因素試驗(yàn)，每處理3次重復(fù)，每個處理接種20個三角瓶；50天后觀察并記錄類原球莖體褐化和生長狀況。