[發(fā)明專利]一種檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的方法及試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310659976.5
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN103642920A
• 公開（公告）日: 2014-03-19
• 發(fā)明（設計）人: 曾靈;蔣建新;杜娟;王海燕;顧瑋;岳彩黎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務所 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.一種檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

1）特異性引物的設計

根據(jù)被證實的RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點，設計特異性擴增引物和測序引物，其中，所述特異性擴增引物中的一條用生物素標記；

2）PCR擴增

以待測標本的DNA為模板，用步驟1）所述的特異性擴增引物進行PCR擴增，得PCR擴增物；

3）焦磷酸測序

將步驟2）所得PCR擴增物采用堿變性使其分開成單鏈，取其中被生物素標記的單鏈PCR擴增產(chǎn)物純化后，與步驟1）所述測序引物進行雜交反應，并分析結(jié)果以判斷所述待測標本的RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點是否具備多態(tài)性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的方法，其特征在于：步驟1）中，所述的RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點包括：rs1800625和rs2070600位點。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的方法，其特征在于：

所述rs1800625位點的上游擴增引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游擴增引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示，測序引物如SEQ?ID?NO：3所示；所述rs2070600位點的上游擴增引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示，下游擴增引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示，測序引物如SEQ?ID?NO：6所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的方法，其特征在于：所述步驟2）中，所述PCR擴增為所述rs1800625位點和所述rs2070600位點組合進行雙重PCR擴增。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的方法，其特征在于：所述步驟3）中，對所述rs1800625位點和所述rs2070600位點組合進行雙重焦磷酸測序。

6.用于檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的特異性擴增引物，RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的焦磷酸測序引物，以及PCR反應液、PCR產(chǎn)物篩選液、焦磷酸測序反應液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的試劑盒，其特征在于，所述特異性擴增引物如SEQ?ID?NO:1-2所示，和/或如SEQ?ID?NO:4-5所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的試劑盒，其特征在于，所述測序引物如SEQ?ID?NO:3所示，和/或如SEQ?ID?NO:6所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測RAGE家族基因標簽單核甘酸多態(tài)性位點的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標記所述特異性擴增引物的生物素。