[發明專利]一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法

有效

• 申請號: 201310658409.8
• 申請日: 2013-12-09
• 公開（公告）號: CN103626814A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 索有瑞;胡娜;丁晨旭;張秋龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C07H17/065
• 分類號: C07H17/065;C07H1/08;C09B61/00
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

技術領域

本發明涉及一種分離制備花色苷單體的方法，尤其涉及一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法。

背景技術

黑果枸杞(Lycium?ruthenicum?Murray)為茄科(Solanaceae)枸杞屬多年生灌木，具有顯著的生理活性。藏醫典籍《晶珠本草》和《四部醫典》均記載：黑果枸杞味甘、性平、清心熱、用于治療心熱病、心臟病、月經不調、停經的病癥。《維吾爾藥志》記載：黑果枸杞果實可治療尿道結石、癬疥、牙齦出血等病癥，民間則用做滋補強壯、明目以及降壓藥。黑果枸杞中含有豐富的花色苷素類(Anthocyanins)天然色素、花色素和總多酚等，有較強的抗氧化活性，是一種藥食兩用的植物，近年來頗受廣大消費者的青睞。

花色苷是一種天然的水溶性色素，屬于類黃酮化合物，廣泛存在于植物的花和果實中，具有預防血栓、抗癌、抗氧化、抗真菌、抗突變、延緩衰老等重要的生理活性，可作為天然色素、天然抗氧化劑以及營養補充劑加以應用。在食品安全問題日益受到人們重視的情況下。花色苷作為一種天然染料，其低毒性、色彩自然艷麗及資源可再生等特點使其在食品、化妝品及藥品行業得到逐步應用。

目前關于花色苷的分離，主要采用高速逆流色譜（HSCCC），其局限性是可看到的色譜峰較少，分離效果差，分離時間長；而高速逆流色譜在分離花青素類物質時，由于花青素的極性較大故分離體系中需要添加甲基叔丁基醚和正丁醇，這兩種高極性的試劑在后續濃縮過程中很難除去，即使能夠除去也需要高溫，這將使花青素受到損失。再則高速逆流色譜為一個開放的分離系統，其中的化學試劑尤其是甲基叔丁基醚很容易揮發出來對操作人員造成危害，并易污染環境。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種分離效果好、耗時短、成本低的從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法。

為解決上述問題，本發明所述的一種從黑果枸杞果實中分離制備花色苷單體的方法，包括以下步驟：

⑴原料預處理：將黑果枸杞果實挑選去雜，用水沖洗，洗去表面浮土，得到處理后的黑果枸杞果實；

⑵配制體積濃度為2%甲酸甲醇溶液：將200?mL甲酸與9800?mL甲醇混合均勻即得；

⑶將所述步驟⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果實中，在室溫避光狀態下按1?g：1?~5mL的比例進行常溫浸提，提取次數為1~3次，每次12~24?h，合并得到提取液；

⑷所述提取液用濾紙除去不溶物、蛋白質、多糖后，得到濾液，該濾液于旋轉蒸發儀上在40~50℃進行真空蒸發濃縮至膏狀，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇；

⑸大孔吸附樹脂的處理：將D-101大孔吸附樹脂用體積濃度為95%?的甲醇浸泡?24?小時，然后用體積濃度為95%?的甲醇進行洗滌，再用去離子水清洗；將該大孔吸附樹脂緩慢裝入樹脂柱中，再用去離子水沖洗至柱中顆粒干凈，不再沉降為止，即得處理后的大孔吸附樹脂；

⑹將所述黑果枸杞花色苷浸膏用體積濃度為2?%的甲酸復溶后上所述處理后的大孔吸附樹脂；上樣后先以4~6倍柱體積的蒸餾水沖柱，然后再以3~6倍柱體積的甲醇沖柱，將花色苷類化合物解吸附，收集流出液；

⑺所述流出液經減壓濃縮后得到花色苷粗品，同時回收甲醇；

⑻將所述花色苷粗品注入高效半制備色譜柱中，在柱溫為25~40℃、流速為15~25?mL/min、進樣量為200~600?mg、檢測波長為525nm的條件下進行半制備色譜分離，根據出峰時間依次收集純度較低的單體矮牽牛素-3,5-O-diglucosides,?矮牽牛-3-O-rutinoside?(trans-p-coumaroyl)-5-O-glucosides；然后采用高效液相色譜系統在柱溫為25~40℃、流速為0.6~1.0?mL/min、進樣量為10?ul、檢測波長為525nm的條件下進行檢測，當樣品純度低于90%時，再次采用高效半制備色譜柱進行二次分離，即得純度≥90%的花色苷單體；最后，所述花色苷單體于旋轉蒸發儀上依次經減壓濃縮、真空冷凍干燥至恒重，即得花色苷單體成品。

所述步驟⑺和步驟⑻中減壓濃縮的條件均是指40~50℃水浴，轉速45~55?r.p.m，真空泵壓力為0.06~0.08MPa。

所述步驟⑻中真空冷凍干燥的條件是指冷肼溫度為-45~-55?℃，真空度為10~15?Pa。